ATCC细胞库在细胞培养上主要使用的方法介绍

　　ATCC细胞库的原理在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

　　细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。

　　ATCC细胞库培养方法：

　　1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

　　①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次；

　　②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

　　③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

　　④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

　　⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

　　⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

　　2、细胞复苏：

　　①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

　　②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

　　3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

　　①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶；

　　②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

　　③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

　　④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

　　北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。