人辅助性T细胞Th17细胞介绍及调控、功能机制

　　细胞名称：人辅助性T细胞Th17

　　产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

　　细胞数量：1x10^6；1x10^6

　　保存温度：37℃；-198℃

　　运输方式：常温保温；运输干冰运输

　　安全等级：1

　　用途限制

　　仅供科研：1类

　　培养体系：DMEM高糖培养基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%双抗（Hyclone）

　　培养温度：37℃

　　二氧化碳浓度：5%

　　简介：人辅助性T细胞Th17细胞取自女性外周血，悬浮培养，形态偏圆。

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　　参考文献Combination of gp130-targeting and TNF-targeting small molecules in alleviating arthritis through the down-regulation of Th17 differentiation and osteoclastogenesis.Park Yeon-Hwa;;Kim Hee Jung;;Lee Kyeong Biochemical and biophysical research communications 2020-02-19

　　验收细胞注意事项

　　1、收到人辅助性T细胞Th17，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。

　　2、收到人辅助性T细胞Th17，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。

　　3、收到人辅助性T细胞Th17后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。

　　4、收到人辅助性T细胞Th17时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

　　5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。

　　6、24小时后，人辅助性T细胞Th17形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。

　　7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2培养。

　　Th17细胞的调控机制

　　Th17不同于Th细胞亚群，或者Th细胞最显著的特点是它极易受环境的影响，目前已知的环境微生物，盐分，低氧和发热均可对其功能塑造产生巨大影响。不仅如此，Th17细胞的功能也是多样的，其在自身免疫病中主要是起到促炎的作用；在感染性疾病中则具有多种身份，但是可以确定的是Th17细胞对机体的抗感染功能具有重要作用；而在肿瘤中，Th17细胞的功能就更加多样化，其在不同因素引起的、不同癌型、不同阶段中发挥着不同程度的促癌和抑癌作用；最后，Th细胞对人体行为也有重要作用，其可以穿过血脑屏障，调节人体的神经系统。

　　Tfh细胞也是董晨老师首次发现的，但是Tfh细胞相对于Th17的研究较少，在2008年，人们才逐渐开始认为Tfh细胞代表一种独特的CD4+T细胞谱系。

　　除了促进炎症，CD4+T细胞的另一个基本功能是帮助B细胞，其标志是在淋巴器官中形成生发中心(GC)结构。在GCs中，B细胞过度增殖;免疫球蛋白基因发生体细胞高突变，转换抗体同型，并分化为浆细胞和记忆细胞；T细胞产生IL-21和CD40L对GC反应很重要。事实上，Th1、Th2和Th17细胞，包括它们的标志性细胞因子和转录因子，在GC发育中似乎不重要。而GC中的T细胞，主要是Tfh细胞，最初被发现表达CXCR5趋化因子受体，也被所有B细胞表达，定位于B细胞滤泡附近。

　　Tfh细胞的功能机制

　　当T细胞被激活后，Bcl6的表达会诱导其向Tfh分化途径。Choi等人在急性淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)感染模型中表明，Bcl6的诱导早于抗原特异性CD4+T细胞在树突状细胞启动后的第二次细胞分裂。Bcl6表达增强的T细胞也表达CXCR5，但不表达CD25或Blimp-1，提示Tfh和非Tfh谱系的早期分离。

　　由于T细胞依赖性体液免疫是适应性免疫的重要组成部分，所以Tfh细胞在免疫功能和免疫介导疾病中越来越重要也就不足为奇了。后续逐渐有研究证实Tfh在机体抗感染，自身免疫病，以及肿瘤免疫中都发挥着重要作用。