支原体简介

支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。
支原体是在1898年发现的，又称人形支原体，是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径0.1~1.0mm），在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。
 

支原体污染的来源

包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
 

支原体污染对细胞的影响

1、影响细胞的生长状态及形态
支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至停止；细胞状态变差，生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生浑浊。会导致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。
2.影响细胞的代谢和功能
（1）培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍；
（2）支原体活动使培养基成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质），影响细胞代谢；
（3）支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；
（4）支原体消耗细胞的核苷库—染色体异常。
3、其他
 此外，支原体污染还会影响一些病毒在细胞中的产量、使恶性细胞致癌能力下降、影响淋巴细胞分化等。
 
 

支原体污染的检测方法

1、培养法
原理是利用营养丰富的培养基，直接对待检细胞、血清等进行支原体培养。
缺点：灵敏度低，试验周期长，不能检测到种且不适用于检测所有支原体。
2、DNA荧光染色法
利用荧光Hoechst33258标记细胞和支原体DNA,在紫外光(波长为630 nm)激发下产生黄绿色荧光，利用荧光显微镜观察支原体是否存在。
缺点：有时易出现假阴性和假阳性
3、聚合酶链反应(PCR)法
    通过扩增被检测标本中的支原体DNA ,再进行琼脂糖凝胶电泳。电泳完毕，将电泳胶在紫外投射仪下观察，根据标准分子量及阳性对照、内对照条带，观察待测样品中是否有阳性条带。
具体的PCR检测支原体方法，可加QQ:2018519617向汉恒产品专员索取。
4、电子显微镜法
5、相差显微镜检测
6、3-H胸腺嘧啶掺入法
7、酶联免疫吸附试验、免疫荧光法
 
 

支原体污染清除方法

细胞一旦发生了支原体污染，一般会丢弃，以免污染其他的细胞。然而，对于一些珍贵的细胞，需要清除支原体。
汉恒生物的支原体清除试剂SaveIt可以在不影响细胞状态和细胞代谢的前提下，清除和预防支原体，并且处理过的细胞不会重新感染支原体，是目前对抗支原体最理想的方法。
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