您所不知道的荧光检测小贴士

 

1.荧光检测小贴士

 

荧光功能检测是利用荧光染料与样本中的靶分子（DNA或RNA或蛋白质）特异性结合后激发荧光信号，从而精确定量靶分子浓度的一类常用分子检测方式。

 

目前随着新一代测序（NGS）、芯片分析（Microarray）、和实时定量PCR（qPCR）等实验的大量应用，精确测定样本中的DNA或RNA已成为现在实验的刚性需求。但对于大多数实验室而言，荧光计的使用频率并不高，如若觉得单买一台荧光计不划算的话，那么奥盛Nano系列Nano-500将可以轻松解决您的这个小烦恼（图1）。

                                                                                                                                               

图1. 奥盛Nano系列Nano-500

 

Nano-500微量分光光度计不仅可以满足常规的实验室需求，进行核酸和蛋白等检测，其最大的亮点便是新增的荧光计功能（图2），您仅需搭配荧光分析试剂盒便可完成对低浓度DNA、RNA和蛋白的精确定量(图3）。

 

                                                                              

 

图2. Nano-500荧光计检测

                                                                                                                                                                             

图3. 荧光分析试剂盒

 

以往，我们大多采用分光光度计来测定260 nm处的吸光度来对DNA和RNA进行定量。尽管这种方法被广泛采用，但紫外分光光度计的灵敏度不足，无法完成低浓度DNA和RNA的精确定量，而Nano-500荧光计功能则是基于荧光染料法的检测原理（图4），其特异性的检测方式可以使您获得比传统紫外吸光法更加精确的结果。

                                                                                                           

图4. Nano-500荧光检测光路图

 

2.Nano-500的荧光计性能验证

 

Allsheng® 荧光定量分析试剂盒适用于不同浓度双链DNA、单链DNA的精确定量分析，荧光定量试剂盒中的荧光染料能专一性地结合靶分子，荧光量子产率高，摩尔消光系数大，连接靶分子后荧光值至少提高1000倍，有较好的灵敏度和特异性，该试剂盒与Nano-500荧光计配合使用，具有简便、快速、自动化程度高、精确定量等优点，能应用于重组制品外源DNA残留检测、药物残留DNA的检测以及游离DNA含量检测等。

与传统的测吸收光强度的方法（如Nano500）相比，Allsheng® 核酸定量检测试剂盒有更高的灵敏度（图5左）。此外，即使是在有等量RNA同时存在的情况下，Allsheng® 核酸定量检测试剂盒对DNA仍能表现出极高的选择性（图5右）。

                                                                                                                  

图5. Allsheng® 核酸定量检测试剂盒检测性能

 

使用Allsheng® HS dsDNA 定量检测试剂盒与Q牌 HS dsDNA 定量检测试剂盒，分别对已知浓度的标准品（图6左）以及浓度未知的待测样品（图6右）进行检测，结果显示两款试剂盒检测结果无明显差异。

                                                                                                            

图6. Nano-500与Q牌仪器的dsDNA 定量检测

3.如何获得更优的试验结果

1.温度对荧光强度影响较大，建议检测以22-25℃为试剂配制温度。

2.同一样品不间断重复检测会导致荧光淬灭，导致荧光值读取不稳定，此为正常现象（如需连续检测，需间隔3min）。

3.实验过程中，需要注意全程佩戴手套，一方面防止手指直接接触PCR管壁影响结果，另一方面保护操作者健康。

4.总结

Nano-500的微量检测（dsDNA浓度范围：2-15000ng/ul）在高浓度的检测中已完全满足多数实验的要求，附加的荧光功能亦在低浓度（0.5pg/ul）检测中填补了微量检测的不足，因而拥有一台Nano-500微量分光光度计将让您的实验检测的道路上一路畅通无阻！

 

-End-