上海达为科生物科技有限公司
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Transwell 的实验方法及注意事项
人阅读 发布时间:2021-08-31 11:31
实验步骤:
(1)实验前将保存在 -20℃ 的基质胶转移至 4℃ 冰箱融化过夜,使用前用无血清培养基按培养基:基质胶 = 2:1 的比例稀释;
(2)接种前将 24 孔板和 Transwell 小室用 1×PBS 浸泡 5min 湿润小室。(侵袭实验需要加一步:在小室中铺 80µL matrigel 胶,37℃ 培养箱中放置 30min 使其凝固。)
(3)用胰蛋白酶消化细胞后,用无血清培养液洗涤细胞,用含有 1%FBS 的培养基重悬细胞,计数,稀释细胞悬液到 2×105 细胞/mL(侵袭实验中稀释细胞悬液到 4×105 细胞/mL),接种到 Transwell 小室内,每个小室加 0.3mL 细胞悬液(侵袭实验中每个小室加 0.2mL 细胞悬液),下层的 24 孔板中加入 0.70mL 含 10%FBS 的完全培养液,每组 3 复孔,置于 37℃ 培养箱中培养 24h;
(4)培养 24h 后(侵袭实验培养 48h 后),每孔加入 1mL 4%溶液,室温固定 10min;
(5)染色:吸去固定液,用 1×PBS 洗涤一次,每孔加入 1mL 0.5% 结晶紫溶液,染色 30min 后用 1×PBS 洗三次,晾干;
(6)观察:用棉签小心擦去 Transwell 小室内没有迁移的细胞,置于 200×显微镜下观察,计数每个视野中的细胞数。
(7)统计分析
注意事项:
1.将小室放入培养板时,要注意不要有气泡产生,因为一旦有气泡,下层培养液的趋化作用就减弱了。
2.用棉签小心擦去 Transwell 小室内没有迁移的细胞时,不能碰到已经穿膜的细胞。
3.难穿膜的细胞可以用无血清培养基饥饿处理 12-24h。
(1)实验前将保存在 -20℃ 的基质胶转移至 4℃ 冰箱融化过夜,使用前用无血清培养基按培养基:基质胶 = 2:1 的比例稀释;
(2)接种前将 24 孔板和 Transwell 小室用 1×PBS 浸泡 5min 湿润小室。(侵袭实验需要加一步:在小室中铺 80µL matrigel 胶,37℃ 培养箱中放置 30min 使其凝固。)
(3)用胰蛋白酶消化细胞后,用无血清培养液洗涤细胞,用含有 1%FBS 的培养基重悬细胞,计数,稀释细胞悬液到 2×105 细胞/mL(侵袭实验中稀释细胞悬液到 4×105 细胞/mL),接种到 Transwell 小室内,每个小室加 0.3mL 细胞悬液(侵袭实验中每个小室加 0.2mL 细胞悬液),下层的 24 孔板中加入 0.70mL 含 10%FBS 的完全培养液,每组 3 复孔,置于 37℃ 培养箱中培养 24h;
(4)培养 24h 后(侵袭实验培养 48h 后),每孔加入 1mL 4%溶液,室温固定 10min;
(5)染色:吸去固定液,用 1×PBS 洗涤一次,每孔加入 1mL 0.5% 结晶紫溶液,染色 30min 后用 1×PBS 洗三次,晾干;
(6)观察:用棉签小心擦去 Transwell 小室内没有迁移的细胞,置于 200×显微镜下观察,计数每个视野中的细胞数。
(7)统计分析
注意事项:
1.将小室放入培养板时,要注意不要有气泡产生,因为一旦有气泡,下层培养液的趋化作用就减弱了。
2.用棉签小心擦去 Transwell 小室内没有迁移的细胞时,不能碰到已经穿膜的细胞。
3.难穿膜的细胞可以用无血清培养基饥饿处理 12-24h。