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[新品]可染7色彩虹的低丰度蛋白检测神器-TSA免疫荧光技术

人阅读 发布时间:2020-05-25 16:02

一、免疫荧光技术
免疫荧光(Immunofluorescence, IF)技术是根据抗原抗体反应的原理,将已知抗体制成荧光抗体,荧光抗体作为探针检测组织或细胞内相应抗原。用荧光显微镜观察在组织或细胞内形成含标记荧光素的抗原抗体复合物来确定抗原的性质、定位及用定量技术测定含量。
Opal/TSA多标免疫荧光技术较传统技术(一抗直标、二抗间接标记和链霉亲和素-生物素等)有信号放大倍数高、操作简单、多重标记不受限制且成本低等优势。

 
  Opal/TSA多标染色技术 传统免疫荧光
适用范围 ICC、IHC和原位杂交(FISH)应用中的中低丰度靶标 ICC、IHC和原位杂交(FISH)应用中的高中丰度靶标
靶点数目 不受限制(最多可同时染色8种) 一般标记3种
抗体种类 同种属的不同一抗即可,连接辣根过氧化物酶的同种属二抗 不同种属的不同一抗,连接荧光探针的不同种属二抗
染色策略 任何样本无需任何染色策略,简单的重复前一步的染色过程,样本/靶点的差异不影响染色过程,操作简单 样本抗原的空间位置的差异,需要设计复杂的染色策略。样本/靶点的差异导致染色策略的差异,染色过程复杂、多变
染色效果 高染色分辨率和染色特异性,信号强度强,无背景影响,各靶点的信噪比大大提高,适合组织基于单细胞的定量分析 信号强度较弱,各种抗体间存在互相影响,背景较高,对基于单细胞的定量分析不利
应用范围 二抗具备通用性,所有的研究领域均可使用 二抗不具备通用性,应用领域受到局限

二、 TSA原理
酪酰胺信号放大(TSA)是一种基于辣根过氧化酶(HRP)的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(已标记荧光的酪胺在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点)产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合,从而使目标蛋白标记上特异的荧光或生物素。

三、 TSA产品特点
3.1 适用广,多色标记。细胞和组织都可染色,且标记靶点数量不受限制,目前最多可8色标记(含DAPI)。
参考文献:Spatial computation of intratumoral T cells correlates with survival of patients with pancreatic cancer 
Nature Communications volume 8, Article number: 15095 (2017)  
DOI: 10.1038/ncomms15095

3.2 多重标记可避免抗体种属交叉问题。对前一轮非共价结合的抗体进行微波处理并进行清洗,共价结合的荧光素留存在样品上,周而复始进行多重标记。
3.3 染色特异性好,信号强度高,适合低丰度靶标。据数据显示荧光亮度比传统免疫染色高100倍,且节省抗体(一抗可1:200-1:3000稀释)
3.4 石蜡切片样本荧光染色背景干净。解决了传统组化及荧光染色石蜡切片背景高的问题。

四、 TSA实验步骤(组织切片为例)

注意事项:
1)冷冻切片30μM厚度为佳;2)避免切片干燥导致背景高;3)H2O2孵育时间不宜过长一般在5-10min;4)选择特异性好的一抗。


五、 TAS实验图
5.1 TSA&荧光二抗AF488-IgG(Hela细胞)
  YF488-Tyramide AF488-IgG
阴性组
 

 
实验组
结果显示:用常规免疫方法检测到信号很弱,用TSA可得到很明亮的信号(信号放大作用)。

5.2 YF-Tyramide石蜡切片染色
  YF350-Tyramide YF488-Tyramide YF594-Tyramide
阴性  
 
 
 
 
 
实验      
结果显示:UE YF-Tyramide染色石蜡切片效果良好,且无非特异性染色,染色背景干净。

5.3 YF-Tyramide细胞染色(Hela细胞)
  Biotin-Tyramide YF488-Tyramide YF594-Tyramide
阴性组      
实验组      
结果显示:UE biotin-Tyramide、YF488-Tyramide和YF594-Tyramide染色细胞效果良好,且无非特异性染色。

六、UE TSA产品目录
货号-规格 产品名称 目录价(RMB)
Y6081-50 slides YF®350 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG 1490
Y6081-200 slides 4200
Y6082-50 slides YF®350 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG 1490
Y6082-200 slides 4200
Y6083-50 slides YF®350 Tyramide Kit, HRP Streptavidin 1490
Y6083-200 slides 4200
Y6084-50 slides YF®488 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG 1490
Y6084-200slides 4200
Y6085-50 slides YF®488 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG 1490
Y6085-200 slides 4200
Y6086-50 slides YF®488 Tyramide Kit, HRP Streptavidin 1490
Y6086-200 slides 4200
Y6087-50 slides YF®555 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG 1490
Y6087-200 slides 4200
Y6088-50 slides YF®555 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG 1490
Y6088-200 slides 4200
Y6089-50 slides YF®555 Tyramide Kit, HRP Streptavidin 1490
Y6089-200 slides 4200
Y6090-50 slides YF®594 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG 1490
Y6090-200 slides 4200
Y6091-50 slides YF®594 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG 1490
Y6091-200 slides 4200
Y6092-50 slides YF®594 Tyramide Kit, HRP Streptavidin 1490
Y6092-200 slides 4200
Y6093-50 slides YF®640 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG 1490
Y6093-200 slides 4200
Y6094-50 slides YF®640 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG 1490
Y6094-200 slides 4200
Y6095-50 slides YF®640 Tyramide Kit, HRP Streptavidin 1490
Y6095-200 slides 4200
Y6096-50 slides YF®680 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG 1490
Y6096-200 slides 4200
Y6097-50 slides YF®680 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG 1490
Y6097-200 slides 4200
Y6098-50 slides YF®680 Tyramide Kit, HRP Streptavidin 1490
Y6098-200 slides 4200
B6099-50 slides Biotin Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG 1490
B6099-200 slides 4200
B6100-50 slides Biotin Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG 1490
B6100-200 slides 4200
B6101-50 slides Biotin Tyramide Kit, HRP Streptavidin 1490
B6101-200 slides 4200
YT0069-100μL YF®350 Tyramide,200× 3063
YT0070-100μL YF®488 Tyramide,200× 3063
YT0071-100μL YF®555 Tyramide,200× 3063
YT0072-100μL YF®594 Tyramide,200× 3063
YT0073-100μL YF®640 Tyramide,200× 3063
YT0074-100μL YF®680 Tyramide,200× 3063
BT0075-100μL Biotin Tyramide,200× 3063

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