避坑！PE储存的硫酸铵怎么除？一根PD-10柱，小白也能一次搞定

   小伙伴们在了解PE染料时，都有这样的疑惑：规格是1mg，应该是固体，为啥染料呈现的确是液体形式呢？这个就在于它特殊的储存方式-----保存在硫酸铵溶液里。那为什么要储存在硫酸铵溶液里呢，那使用时又要怎样去除硫酸铵溶液呢？不用复杂设备，用一根PD-10脱盐柱，就能轻松搞定纯化脱盐，看完这篇，“小白”也能一次做成功～

一、PD-10脱盐柱纯化PE的过程是怎样的？

全程重力自流操作，不用离心、不用加压，全程避光操作，保住PE荧光活性，步骤拆解清晰，照着做不踩坑～

前期准备

- 样品：硫酸铵悬浮的PE染料（用之前轻轻颠倒混匀，别剧烈摇晃，避免伤了蛋白）

- 耗材：PD-10葡聚糖凝胶脱盐柱、无菌无胺PBS缓冲液、干净离心管

- 环境：全程避光、尽量低温操作，别让阳光直射，不然PE荧光就废了

步骤1：柱子平衡（最关键，少一步都不行）

1. 撕掉PD-10柱子上下的密封封口，垂直固定在支架上，一定要保持竖直，别倾斜

2. 让柱内原本的保存液自然流干，别用力挤压、吹打凝胶柱，容易把凝胶搞坏

3. 加5mL无菌无胺PBS缓冲液，等它完全流干，重复3次，把柱子环境彻底稳住

步骤2：上样加载

1. 吸取混匀后的PE原液，体积控制在1.0-1.5mL（这是PD-10的最大上样量，千万别超标，不然脱盐不彻底）

2. 把PE样品慢慢加到凝胶柱中央，等样品完全渗进凝胶里，液面和凝胶表面齐平就好

步骤3：洗去盐分（废液直接弃，别心疼）

加2mL PBS缓冲液洗脱，这段流出来的液体全是高浓度硫酸铵废液，直接倒掉，绝对不能收集，这样才能把残留的盐分彻底冲干净。

步骤4：收集纯化好的PE（重点来了！）

1. 换一个干净的离心管，准备接成品

2. 分次加PBS缓冲液，每次加1mL，一共收集3mL左右的洗脱液

3. 收集到的淡红色清亮液体，就是彻底脱盐、没有硫酸铵残留的纯PE溶液啦

二、纯化过程中需要注意些什么？

- 全程严格避光：PE荧光怕光，见光容易淬灭失效，操作全程用锡纸遮挡，远离强光、灯光直射

- 严禁用含胺缓冲液：绝对不能用Tris、HEPES含氨基缓冲液，会直接阻断后续PE活化反应，只能用纯PBS

- 禁止加压挤压：全程重力自流，不要捅凝胶、不要用力吹吸，避免凝胶压实，导致脱盐不彻底

- 不要过量上样：PE样品控制在1.5mL以内，过量会导致盐分除不干净，实验失败

- 纯化后立即使用：脱盐后的PE没有硫酸铵保鲜，稳定性变差，建议4℃短期保存，24小时内做完活化偶联

- 观察液体状态：纯化后的PE清亮不浑浊、无白色盐粒、无沉淀，才算纯化合格

  看到这里，相信小伙伴们再也不用疑惑“1mg PE固体为啥是液体”啦！其实都是硫酸铵保鲜的小技巧，而去除硫酸铵也一点不复杂，一根PD-10脱盐柱，跟着步骤一步步来，避光、控量、弃废液，十几分钟就能得到纯净PE，哪怕是实验小白，也能轻松拿捏，再也不用为脱盐翻车发愁～