黄嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定原理：
XOD 催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm 下有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×4 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次 ）；
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
操作步骤：
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。
2、XOD 检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL 试剂一，充分混匀，现配现用；
3、测定前将XOD 检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）水浴10min。
4、取 1mLXOD 检测工作液于 1mL 石英比色皿中，再加入 35μL 样本，混匀，室温下立即
测定290nm 下的初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2，计算ΔA＝A2-A1。
XOD 活性计算：
1、血清（浆）XOD 计算：单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=2424×ΔA
2、组织、细菌或细胞中XOD 计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T 
=2424×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹] ÷（W ×V 样÷V 样总）÷T=2424×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。XOD（nmol/min/10⁴ cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 样÷V 样总）÷T=4.848×ΔAV 反总：反应体系总体积，1.035×10^-3 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×10⁴ L/ mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总 数，500 万。