淼灵siRNA产品使用说明书

●产品信息

淼灵通过常规化学合成的siRNA产品为21~ 23mt的双链小分子RNA即用型试剂，产品以冻干粉的形式常温运输,收到产品后，请于-20度保存,每管为5nmol或2.5nmol， 1OD =2.5 nmol=40 μg。

 

●使用说明

1、siRNA呈很轻的干膜状附在管壁上，打开管子前先离心，然后再慢慢打开管盖，溶解时请加足量RNas-freeH.O或灭菌ddH2O后盖上管盖，震荡溶解，按每2.5nmol添加125μl水。

2、为避免外界因素(包括酶，极端pH或者温度条件等)导致产品降解，所有操作请严格遵循RNA操作规则。实验过程中，产品最好于冰上放置，使用完毕后请于-20C~ -80C小心保存。

 

●转染步骤

以24孔板，转染浓度为50nM为例，仅供参考，需要做预实验确定各参数

1、接种细胞：

①贴壁细胞:转染前24h,在400 μl无抗培养基中接种0.5~2×105个细胞，转染时细胞融合度为30~50%。

②悬浮细胞:转染前24h, 在400μL无抗培养基中接种0.5~2×105个细胞，转染时细胞数量应在4~8×105/孔。

2、转染步骤：

①用50 uL Opti-MEM 稀释siRNA (转染细胞的终浓度为50 nM), 轻轻吹吸3~5次混匀。

②轻轻颠倒混匀转染试剂，用50 uL Opti-MEM稀释1μL转染试剂轻轻吹吸3- 5次混匀，室温下静置5 min.

③混合转染试剂和siRNA稀释液，轻轻吹吸3~5次混匀，室温下静置20 min.

④转染复合物加入到24孔细胞板中，10uL/孔, 前后轻摇细胞板混合均匀。

⑤细胞板置于37C、5%CO2培养箱中培养18-48h,转染4-6h后换新鲜培养基。

 

●产品注释

1、阴性对照:阴性对照siRNA不会引起任何基因的沉默，它能够帮助我们确认基因表达水平的降低是否是序列特异性的RNAi的结果

2、FAM阴性对照:用荧光素衍生物FAM标记的阴性对照品，用来检测转染效率

3、阳性对照:阳性对照是针对管家基因GAPDH的有确定干扰效果的siRNA，用于检测实验方法中的转染、RNA提取物和检测方法是否是可靠的