科研用慢病毒使用说明书

●产品信息

规格	发货形式	运输方式	保存温度
1×108TU/mL	5×200μL	干冰	负80℃

●使用说明

在正式实验前，需要进行慢病毒感染目的细胞的预实验。一方面是检测慢病毒是否能够感染目的细胞，另一方面是摸索慢病毒感染目的细胞的最佳条件（即最佳的MOI值）。通常使用带有荧光标记的慢病毒，具体实验步骤如下：

(一) 96孔板感染

1、实验前一天分别接种1×10⁴数量级目的细胞于96孔培养板中（至少接种5个孔的细胞），进行病毒感染时细胞的密度约为50～60 %。

2、10倍稀释法稀释病毒：以滴度为1×10⁸ TU/mL的病毒为例，具体做法如下：取10 μL待测病毒原液加在90μL完全培养基中混匀；取10 μL病毒混合液，加入90μL完全培养基中混匀；（混匀时尽量不要产生气泡），增了增加感染效率，可以使用终浓度为5-10μg/mL的polybrene。

3、各吸取10μL病毒稀释液到相对应的96孔板中，将三个不同梯度的病毒液，各取10 μL加到每组的三个孔中，计算可知，三个孔的MOI分别为100、10、1。（如果所用的病毒滴度未达到1×10⁸ TU/mL，则相应增加病毒体积使得能够得到不同的MOI。客户也可以根据不同的稀释倍数，摸索更为细致的MOI值）。

4、将细胞置于37℃，5% CO₂培养箱培养，48h补加100μL完全培养基。感染48-72 h后，观察荧光表达情况。对于生长迟缓代谢慢的细胞，可以适当延长观察时间；根据细胞的生长状况、荧光表达情况综合判断病毒在哪个稀释倍数的作用效果最好，并以此稀释度下的病毒浓度作为后继实验的依据。

(二) 6孔板感染

1、接种1×10⁵细胞到6孔板中，37℃、5% CO2培养箱继续培养，用于第二天感染，感染时的细胞密度约为50-60%。

2、根据MOI计算感染需要的慢病毒体积：（慢病毒体积=MOI×细胞/滴度）。若未知病毒滴度，一般加80-100uL病毒浓缩液+1mL培养基+7.5uL polybrene（终浓度为5-10ug/ml）。

3、弃掉细胞中的培养基，将上述病毒和polybrene加入到细胞中，轻轻混匀放回培养箱继续培养；

6、培养过夜后，补充1mL新鲜完全培养基继续培养；观察荧光蛋白表达情况。

●注意事项

1、慢病毒避免反复冻融；

2、穿实验服，使用一次性手套、口罩，实验完毕后请消毒手套并洗手；

3、所有操作均应在生物安全柜中进行；

4、操作病毒时要小心，病毒液污染台面，请立即用1% SDS溶液擦拭干净；

5、接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液等需用消毒液处理后，方可丢弃。