利用Symphony X缩短合成（65-74）ACP肽循环时间和溶剂消耗

1 介绍

新的优化的快速肽合成方法，结合平行多肽合成仪器，可以高通量地生产肽库。

使用 Symphony X 全自动高通量多肽合成仪探索合成方案的优化，通过在偶联步骤后去除 DMF 洗涤来减少循环时间并减少溶剂消耗和废液产生。

2 方法和分析

使用 Fmoc-Gly-Wang 树脂（取代度 0.32 mmol/g）在 Symphony X 多肽合成仪上以 20 μmol 的规模合成 ^65-74ACP 肽。在室温下，用 20% Pip（DMF 中）进行两次脱保护，每次 2.5 分钟。洗涤：DMF 6 x 30 秒。在室温下，以 100 mM AA（10 当量）、100 mM HCTU（10 当量）和 200 mM NMM（20 当量）的最终浓度进行偶联，每次 2 x 5 分钟。使用的裂解混合物是 TFA/Anisole/H₂O/EDT，反应在室温下进行 2 小时。对每个肽进行三次重复.

将所得粗肽溶解于水中，使用 Varian ProStar HPLC 进行分析，使用 C18、180 Å、5 um、250 x 4.6 mm 柱（Agilent Polaris），流速为 1 mL/min，使用 5-95% B 梯度洗脱，其中缓冲液 A 为含 0.1% TFA的水，缓冲液 B 为含0.1% TFA的yiqing。检测波长为 214 nm。质谱分析在配备 C18、100 Å、2.6 um、50 x 2.1 mm 色谱柱 (Phenomenex Kinetex) 的 Shimadzu LCMS-2020 Single-Quad 质谱仪上进行，分析时间为 7 分钟，流速为 1 mL/min，梯度为 5-50% B洗脱，其中缓冲液 A 为含 0.1% 甲酸的水，缓冲液 B 为含0.1% 甲酸的yiqing。

3 结果

通过减少偶联后的清洗次数，优化了 ^65-74ACP 的合成。消除偶联后清洗可将循环时间从 2.8 分钟缩短至 2.3 分钟，并将溶剂消耗量从 55 毫升缩短至 41 毫升，而不会显著影响最终肽的纯度（表 1）

表 1 洗涤方案对肽纯度、循环时间和溶剂消耗的影响。肽序列：VQAAIDYING

图 1^65-74ACP 的 HPLC 检测图谱：(上) 偶联步骤后无需 DMF 清洗，(下) 偶联步骤后 3 次 DMF 清洗

4 结论

利用Symphony X 全自动高通量多肽合成仪消除偶联后清洗可带来以下好处：

• 整体循环时间缩短 20%

• 整体溶剂消耗量减少 25%

• 纯度几乎保持不变

• 肽合成时间和成本整体改善

Symphony X 全自动高通量多肽合成仪

• 24个独立反应通道

• 支持原位活化和预活化

• 8个试剂瓶，40个氨基酸位置

• Single-Shot^TM特殊氨基酸传输技术

• 内置专利设计的PurePep Pathway流路系统

• 红外加热（选配，第一个通道）

• IntelliSynth^TM UV监测（选配，第一个通道）

• 肽预测软件

• 远程邮件提醒

• 软件设计符合21 CFR Part 11合规性

• 自动原位切肽

• 自动多肽纯化