N家干货 | CDC活性服务及血清筛选（上）

经典途径的主要机制是抗体IgG和IgM的恒定区发挥作用，当其结合于靶细胞表面时，经典的补体途径激活，从而诱导靶细胞表明形成膜攻击复合物(MAC)--“孔洞”，最终使其裂解死亡。

当IgG抗体的Fab部分结合到这些抗原后，如果满足了一定的条件，这些IgG分子的Fc区域会相互作用、联结。当六个结合了抗原的IgG分子在细胞表面联结成一个环形的六聚体后。IgG的Fc上暴露出能结合C1q的位点。C1q是补体系统的第一个蛋白成员，它有六只长臂(gC1q)，分别抓住六个Fc区，并同时携带着一对C1r和一对C1s蛋白酶（C1r2s2）。C1r和C1s开始引发一系列级联反应，其涉及的补体家族成员包括C4,C2,C3,C5,C6,C7,C8和C9。C5b、C6-C9再组装成膜攻击复合体（MAC）。最后MAC会在细胞膜上凿孔，引起细胞裂解。

3.影响CDC的因素

（1）抗体亚型：

IgG3的CDC作用最大，其次是IgG1，IgG2和IgG4极其微弱。利用基因工程在抗体铰链区或恒定区CH2进行氨基酸替换可以增强或减弱CDC作用。

（2） 靶细胞抗原的表达水平：

靶细胞需要表达足够的抗原来结合抗体和激活补体。抗原表达不足，不能完全激活补体。

（3）靶细胞表面表达其他蛋白：

如CD46、CD55和CD59膜蛋白会抑制或减弱CDC作用。补体的激活是级联放大效应，靶细胞表达以上膜蛋白会在不同环节抑制激活。

（4）补体的来源：

靶细胞是否与所选择的动物种属血清相匹配，得到的人鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体均需是使用人的血清，兔的血清偶尔也会用到。

（5）抗体抗原结合位相：

抗体抗原结合方位及相邻抗体的排列方式会显著影响CDC的作用。部分抗体能激活补体，有很强的CDC作用;部分抗体不同激活补体。

4.CDC的检测方法

CDC assay的过程较简单，通常将靶细胞与待测抗体37°孵育1-2小时，随后加入人血清共同孵育1-24小时，即可检测裂解的死细胞或活细胞。或则直接将待测抗体和血清同步加入靶细胞孵育4-24小时后测试死细胞或则活细胞，若靶细胞是报告基因，还可以利用报告基因方法测试。方法如下：

✦ 荧光染料标记

✦ 台盼蓝标记

✦ LDH检测（NovoBio—KT6451—乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒（比色法））

✦ calcein-AM标记

✦ Alamarblue和CellTiter-Blue标记

✦ 51Cr释放实验

5.蛋白CDC活性服务定制分析因素-血清种类

图2. CDC活性化学发光数据图

图3. CDC活性杀伤率数据图

注：不同的人血清，可能测试出不一样的CDC效果。这个实验同时可以用来筛选具有CDC效应的人血清。

6.蛋白CDC活性服务定制分析因素-细胞量

图4. CDC活性化学发光试剂图

图5. CDC活性杀伤率数据图

7.蛋白CDC活性服务定制分析因素-血清含量

图6. CDC活性化学发光数据图

图7. CDC活性杀伤率数据图

8.蛋白CDC活性服务定制分析因素-专属性测试

图8. CDC活性化学发光数据图

图9. CDC活性杀伤率数据图

注：CDC 需要特异性抗体和血清两者缺一不可的结合才能引起CDC。具有特异性