抗体作为基础科学研究和临床试验常用的工具之一，主要通过抗原-抗体的反应揭示蛋白质在生命活动中的变化。

尽管它们被广泛的使用，但是没有相关标准以确保商业抗体特异性和质量上的一致性。这使得科学界一直存在“重现危机”，浪费了科学家们大量的时间和金钱，妨碍生命科学研究的快速发展。因此，对抗体进行敏感性和特异性测试，确保质量和可重复性至关重要。

众所周知，基因敲除（Knock Out,KO）作为最被大家认可、最被信任的一种抗体特异性验证方法，是一项非常稳健的技术，可在不表达目的蛋白的 KO 细胞系或组织中通过检测目的抗体来确证其特异性。

为了确定华安抗体产品的功能性、特异性、敏感性，我们对不同的产品是采用不同的验证策略来确保我们抗体产品在科研工作中的真实有效。为了确保大家可以拥有高度特异性的抗体，我们通过 CRISPR-Cas9 基因组编辑来进行 KO 验证，从而给大家提供研究所需的可靠结果。

CRISPR/Cas9介导编码基因KO的原理，在Cas9剪切DNA导致双链断裂（DSB）后，细胞利用非同源末端连接（NHEJ）进行修复。NHEJ修复会在DSB位点随机引入碱基的插入或者缺失（Indel）。如果这些Indel不是3的倍数将会导致后续的阅读框发生移码，这种移码往往会产生提前终止密码子（premature termination codon，PTC）,导致蛋白功能的丧失（提前翻译终止的多肽一般会被降解），从而达到KO效果。这种技术在最近几年实用性大大增加。这种方法的优点在于，它在同一个细胞系中提供了阳性和阴性的表达模型。

在 KO 细胞系中测试特异性抗体时，特异性抗体不会产生信号，但在野生型 (WT) 细胞系测试特异性抗体时，特异性抗体会产生特异性靶蛋白信号。以这种方式，KO 验证作为真正的阴性对照，以确认抗体对目标蛋白的特异性。
华安生物致力于为全球的科研工作者和工业客户提供高品质的抗体试剂及抗体服务，利用基因敲除技术深入应用于抗体产品验证，并将形成KO验证抗体、KO细胞株、KO细胞裂解物等多条产品线。

KO验证抗体案例展示

01.Anti-Caspase-3 antibody(ET1602-39)

Western Blot analysis of Caspase-3 on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela Caspase 3 KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (ET1602-39, 1/500) was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody(HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.

02.Anti-NF-kB p65 antibody(ET1603-12)

Western Blot analysis of NF-κB p65 on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela NF-κB p65 KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (ET1603-12, 1/500)was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit Ig-HRP Secondary Antibody (HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.

03.Anti-Vimentin antibody(EM0401)

Western Blot analysis of Vimentin on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela Vimentin KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (EM0401, 1/500) was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody(HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.
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