文摘:

有迹象表明，作为辅助剂的抗坏血酸(Asc)的药理学剂量可以改善癌症的化疗管理。这种有利的结果来自于它的细胞毒性作用，这是由于前氧化机制。由于细胞内Ca2+水平的调节有助于维持细胞活力，我们假设Asc的影响之一包括破坏细胞内Ca2+稳态的调节。因此，我们确定Asc是否通过激活百日咳敏感Gi/o偶联的GPCR，进而激活依托泊苷耐药和敏感视网膜母细胞瘤(WERI-Rb1)肿瘤细胞的瞬态受体电位(TRP)通道来诱导细胞内Ca2+内流。Ca2+成像、全细胞膜片钳和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)与使用台盼蓝细胞染料排除RB细胞存活的测量并行进行。TRPM7基因在两种细胞系中的表达水平相似，而TRPV1、TRPM2、TRPA1、TRPC5、TRPV4和TRPM8基因在etopo糖苷耐药的WERI-Rb1细胞中的表达水平下调。在细胞外Ca2+存在的情况下，1mm Asc诱导依托泊苷耐药的WERI-Rb1细胞内Ca2+瞬变量大于其依托泊苷敏感对应物。100 μ M CPZ、500 μ M La3+、10 μ M NAC或100 μ M 2-APB的Ca2+瞬态均明显减弱。这些抑制剂对asc诱导的全细胞电流升高也有相应的抑制作用。百日咳毒素(PTX)预孵育阻断了钙离子内流的上升。显微镜分析显示，暴露于1 mM Asc 4天后，RB细胞系的细胞活力下降了近100%。综上所述，氧化介导的asc诱导的WERI-Rb1细胞毒性的作用之一来自于其促进Gi/o偶联GPCR介导的细胞内Ca2+内流通过TRP通道的增加。因此，设计针对TRP通道调节的药物可能是提高RB化疗疗效的可行途径。此外，Asc可能在抗癌治疗中作为一种可能的支持剂。