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生物学霸

蛋白质免疫印迹是每个初入实验室的小伙伴,都要掌握的一门技艺,今天师兄整理了些实操精华内容给你,希望你能从「实操」篇中有所受益。

蛋白样品制备

做 WB 之前,蛋白质提取是实验的第一步,也是至关重要的,成也提取,败也提取。

蛋白含量测定

z正式开始做 WB 之前,给蛋白质定量,这样可以使内参差不多一致,做出的结果才能漂亮。

SDS-PAGE 电泳

电泳人人都会,但最作为新手的你,可未必能轻松搞定它。

转膜

在转移膜上显色其实就像是画家在画布上作画一样,不光要有好的画笔和颜料,适合的画布也是相当之重要。

封闭与杂交

封闭是为了使我们的抗体仅仅只能跟特异的蛋白质结合而不是和膜结合。在做杂交时,个人建议:还是使用杂交袋进行一抗和二抗的孵育,这样节约抗体。

发光鉴定

WB发光一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。

增强敏感性

若目的条带未出现,或很淡,可使用文中的方法来增强发光强度。