导读

Southern 印迹杂交是进行基因组 DNA 特定序列定位的方法。其原理为利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的 DNA 片段,将胶上的 DNA 变性并在原位将单链 DNA 片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的 DIG 标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定 DNA 分子的含量。

钟鼎 Southern Blot 杂交服务平台

 

钟鼎生物自建立 Southern Blot 杂交服务平台以来,帮助客户完成过拟南芥、大豆、烟草、苎麻、 玉米、棉花、水稻、油菜等多物种检测,成功发表数十篇高水平论文,钟鼎生物的探针使用 DIG(地高辛)标记,具有低噪、高敏、无放射性污染等优点,实验过程中保留原始数据和实验材料,数据真实可信,具有可重复性。我们使用传统的胶片曝光与最先进的自动化学发光成像检测系统相结合,确保捕获最佳信噪比的成像时间点,可以交付给客户品质最好的实验结果,客户可直接使用钟鼎生物提供的 Southern Blot 实验数据向高水平的杂志投稿。点此查看已发表论文>>

 

Southern Blot 服务

服务名称

服务项目

服务报价

DIG(地高辛)探针标记

探针标记/基因

丁香园用户 11 月专享福利|探针标记:0 元 1 200 元/条

索取全部报价>>

Southern Blot 杂交

8 个样品+1 个阳性对照(1 张膜)

我们接受高质量的 DNA 样品,如果需要钟鼎生物提取 DNA 样品,请提供新鲜的细胞、组织或菌液,我们会酌量加收部分服务费用。

 

服务流程

 

客户提交资料

 

1、待杂交目标基因序列和含有杂交基因对应的质粒或菌株

 

2、待杂交的高质量 DNA 样品质量至关重要,决定实验的成败

 

  >>完整的 DNA,客户需提供电泳图

  >>纯度:OD260/OD280=1.8~2.0 

  >>DNA 浓度不低于 50ng/μl,总量 >10 μg,干冰或冰袋低温运输;阳性质粒至少 2 μg

 

3、下单时注明酶切方案,如果项目中需要非常规的限制性内切酶,需额外加收酶切费用或由客户提供。

 

 

发货文件

 

钟鼎生物负责对客户提供样品进行 DIG 探针标记与 Southern 杂交检测技术服务,最终提供检测报告及检测图片

 

  >>DNA 样品电泳检测报告(基因组 DNA 实验样品不返还,请注意保留备份)

  >>DNA 样品酶切电泳检测报告

  >>PCR 法制备 DIG 标记探针电泳检测报告

  >>质粒单酶切电泳检测报告

  >>Southern blot 标准实验流程报告 实验结果检测报告及原始图片

 

Southern Blot 实验案例报告

 

以下为报告节选 ,查看完整案例报告>>

 

探针制备

 

1、采用 PCR 制备探针模板

 

95℃ 预变性 2 min
95℃ 变性 30 s
61℃ 退火 30 s(预变性-退火 35 个循环)
72℃ 延伸 35 s
72℃ 复性 7 min
 

2、琼脂糖凝胶电泳

 

PCR 产物进行 1% 琼脂糖凝胶电泳

 
 

 

Lane M:AL2000 DNA Maker

Lane 1:dUTP 标记的探针

Lane 2:对照的 DNA 片段

 

说明

 

DIG 标记的探针,电泳迁移率会增大,其表现分子量会大于未标记的 PCR 产物,当片段大小一致时,成功标记 DIG 的 PCR 产物如图所示。

 

   

 

基因组 DNA 的提取

 

采用 CTAB 法大量植物基因组 DNA 快速提取试剂盒(钟鼎公司,货号 DN15-10T),提取不同材料的基因组 DNA,电泳检测如下组系列图所示:

 

 

 

 

玉米叶片基因组 DNA

 

棉花基因组 DNA

 

烟草基因组 DNA

       
 

拟南芥叶片基因组 DNA

苎麻叶片基因组 DNA

大豆叶片基因组 DNA

 

 

说明:

无论是客户提供基因组 DNA 或是委托钟鼎公司提取,品质需达到以下标准:纯度:OD260/OD280=1.8~2.0 浓度≥ 50ng/μl 质量 ≥10 μg

电泳检测无蛋白污染和 RNA 污染,基因组 DNA 本身亦无降解,上述图片为钟鼎生物基因组提取试剂盒提取 DNA,欢迎选用。

 

   

 

基因组 DNA 的酶切

 

对基因组进行酶切,依据不同的酶,设置不同的酶切体系(详细酶切方案在具体订单中明确阐述,此处省略),电泳检测酶切产物,如图所示:

 

说明

 

酶切后的基因组 DNA 条带应该呈弥散装分布,酶切实验应先进性预实验,确保选择的内切酶不会切断待检测的基因区域。

 
 

 

基因组 DNA 酶消化电泳检测图

   

 

质粒酶切

 

质粒酶切,根据实际情况设计酶切体系,取 20 μl,进行 1% 琼脂糖凝胶电泳,如下右图所示:

 

说明

 

采用琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒(钟鼎公司,货号 DR01-50T),回收片段,作为阳性对照样品使用

 

 

 

阳性质粒酶切电泳检测图

Lane M:1Kb DNA Ladder

Lane 1:酶切前质粒

Lane 2:酶切后质粒

 

结果保证

 

还在等什么?下一张完美胶片可能就是您的实验数据!

 

以下为部分实验案例,想了解更多物种检测的实验数据,请通过底部信息联系我们。

 

 

 

实验材料:大豆(Glycine Max)

 

实验材料:烟草(Nicotiana tabacum L)

 

实验材料:玉米(Zea mays)

       
 

实验材料:小麦(Triticum aestivumlinn)

实验材料:水稻(Oryza Sativa)

实验材料:苎麻 (Boahmeria nivea)

 

 

说明

1. 上述实验图片为钟鼎生物精选的实验结果,为原始曝光胶片扫描,部分结果已见稿。

2. 由于样品不同,即使是同一物种的实验材料,我们不承诺所有客户的订单都可以达到上述图片效果。

3. 拒绝 PS,钟鼎生物可提供曝光的原始胶片,确保实验结果真实可靠。

 

 

 

保证 Southern Blot 实验结果的准确性与美观性:

 

1、我们使用传统的胶片曝光与最先进的自动化学发光成像检测系统相结合,确保捕获最佳信噪比的成像时间点,可以交付给客户品质最好的实验结果。

2、除去 Marker 和阳性对照,我们建议样品数量不要超过 8 个,样品太多会导致边缘变形。

3、曝光时间太短,弱带无法显示,曝光时间太长,背景会很高,因此我们会调整曝光时间,分别提供 1 小时、2 小时、过夜等不同时间的曝光片,确认实验的结果的准确性。

4、Southern Blot 的灵敏度是有限的,丰度太低的片段无法被检测出来,我们以内参作为实验依据,同时也作为收费依据。

 

关于钟鼎

 

南京钟鼎生物技术有限公司

 

提供分子生物学技术服务,蛋白表达和纯化,蛋白理化性质分析,抗体制备等免疫学相关技术服务;并开发出一系列配套的经济实惠的相关产品,贴近客户使用习惯,提高实验效率。点此获取更多服务信息>>

 

技术支持:400-066-8086

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