真菌β-D-葡聚糖检测与真菌感染诊断
真菌β-D-葡聚糖检测与真菌感染诊断
一、概述
经研究表明，(1-3)-β-D-葡聚糖是一种广泛存在于真菌细胞壁的抗原成分, 占其干燥重量的80%～90%，其它微生物、动物及人的细胞成分和细胞外液均不含有。深部真菌感染患者中血浆(1-3)-β-D-葡聚糖含量增高,两者存在相关性。
当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化代谢后，（1-3）-β-D葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液或其它体液中（1-3）-β-D葡聚糖含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫可迅速对其清除。而在浅部真菌感染中，（1-3）-β-D葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高，它在血液及无菌体液中的存在可以很大程度上视为IFI（深部真菌感染）的标志。
二、深部真菌感染的诊治
近年来，由于造血干细胞移植、实体器官移植的广泛开展、高强度免疫抑制剂和大剂量化疗药物的应用以及各种导管的体内介入、留置等，临床上侵袭性真菌感染(invasive fungal infections，IFI)的患病率明显上升。IFI也日益成为导致骨髓及器官移植受者、接受化疗的恶性血液病和恶性肿瘤患者、AIDS以及其他危重病患者的严重并发症及重要死亡原因之一。由于缺少有效的早期诊断手段，深部真菌感染病死率居高不下。对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断，及早用药治疗。
常规病原学诊断“微生物培养”可为临床提供直接的诊断依据，但其培养方法耗时长（4-7天），不适宜用作早期诊断。并且，随着光谱抗生素、抗菌药物的大量应用，使得培养的阳性率极低。常用的免疫学方法，也由于抗原抗体反应的特异性差，往往对某一疑似真菌感染患者要作多种真菌抗原或抗体检测，既费时又不经济，而且当所用药盒的抗原谱或抗体谱不全时也极易造成漏诊。对一些以往接触过相应真菌抗原的个体，作抗体检测时还会出现阳性反应，因而对抗体的检测往往要求作动态观察才能作出诊断，期末属性较差。
有研究报道血清葡聚糖在念珠菌血症时明显升高，将其用于念珠菌血症的早期诊断明显优于传统的培养法和血清学诊断试验。虽然检测（1-3）-β-D葡聚糖只能提示有无真菌侵袭性感染，不能确定为何种真菌，但也可能转化为一种优势。因近年来，一些罕见的条件致病真菌也可引起深部感染，这就要求一种能迅速确定有无深部真菌感染的方法。因系统抗真菌药物种类较少，抗菌谱较广，且不因真菌种类而异，当检测到标本中的（1-3）-β-D葡聚糖含量较高时，可给予以系统治疗，不必耗时等待鉴定出种属，否则会贻误最佳治疗时机。
因此，血清（1-3）-β-D葡聚糖含量检测不失为一种实用的真菌感染早期诊断方法。并且，相关研究表明，（1-3）-β-D葡聚糖水平在确诊IFI患者的血清中出现持续升高，而随着药物的使用，对药物敏感者可很快出现（1-3）-β-D葡聚糖水平下降及转阴，而药物治疗无效人群（1-3）-β-D葡聚糖值无明显改变。因此，（1-3）-β-D葡聚糖可以用来判断药物的疗效，以协助临床医师及时进行药物种类及剂量的调整。
通过对人体体液进行（1-3）-β-D葡聚糖含量检测，可帮助判断人体是否已被真菌感染。对高危患者的样本进行连续分析，可为临床检测提供入侵真菌的量值或阴性预示值，为临床诊断和治疗提供了一种快速检查方法，对提高病人治疗治愈率和指导医生合理用药，以及促进我国医疗事业的发展具有重要意义。
三、国内外相关发展情况
目前，临床上诊断侵袭性真菌感染(invasive fungal infections，IFI)的方法主要由宿主因素、临床特征、微生物学检查和组织病理学4部分组成。血液、支气管肺泡灌洗液中的各种真菌PCR测定，是诊断IFI的微生物学的检测方法。但传统真菌鉴定方法都因周期长、血培养率低而难于快速诊断。研究者也逐渐将早期诊断的注意力转向建立血清学方法来检测真菌菌体成分或代谢产物，如测定白念珠菌的甘露聚糖、烯醇化酶、D-阿拉伯糖醇等。
鉴于深部真菌感染时，经吞噬细胞处理，菌胞壁降解成分大量入血，90年代初，有学者建立了以检测血浆或血清中真菌胞壁成分曲霉半乳甘露聚糖抗原(GM)和(1-3)-β-D葡聚糖抗原[(1-3)-β-D-gluean，BG]的含量， 用于早期诊断深部真菌感染具有较好灵敏度和特异性，且迅速、简便，并能提示抗真菌药物治疗。
BG检测(也称G试验)是一种新的真菌抗原检测方法，主要由以下研究机构开展，日本东京Wako纯化学研究所，Seikagaku Kogyo公司，Ma-ruha公司和美国Cape Code协会。其中Cape Code协会研制的Fungitell试剂盒已被美国FDA批准用于血液病、肿瘤等免疫受损的患者IFI的诊断。BG是酵母和丝状真菌细胞壁的多聚糖成分，作为真菌抗原具有较高的特异性，原核生物、病毒和人体细胞都不存在这种多聚糖。因此，它在血液及无菌体液中的存在可以很大程度上视为IFI的标志。
真菌细胞壁的主要成分BG的比色法检测试剂盒已广泛用于临床。美国FDA已于2003年批准该试验用于可疑IFI患者血清定性检测。2008年欧洲肿瘤研究治疗组织(EORTC)IFI合作组(IFICG)和国家过敏及感染类疾病研究(NIAID)真菌病研究组(MSG)将G试验结果列为诊断IFI的诊断标准，但试剂盒必须是FDA认证的。国外多个研究中心为评估该试验的特性已做了大量的回顾性调查，证实其敏感度、特异度及临床一致性均较好。