单克隆抗体药物质量控制及HPLC分析技术

CM-STAT色谱柱对鼠腹水纯化而来的单抗异构体的分析

   2014-08-19
字体大小:

从老鼠腹水中纯化而来的单克隆抗体往往含有一些异构体。即使在SDS-PAGE 电泳分析中只显示一条带,但当使用等电聚焦电泳时却可以观察到多条带的存在。

TSKgel CM-STAT 是一款适合于分析抗体异构体的高分辨率、非多孔、弱阳离子交换色谱柱。在本数据中介绍了使用TSKgel CM-STAT 色谱柱进行鼠腹水由来的单克隆抗体异构体分析的应用。同时,我们将通过TSKgel CM-STAT 色谱柱分离获得的不同组分进一步使用等电聚焦电泳进行了鉴定。结果表明,TSKgel CM-STAT 色谱柱确实适合于异构体的分析,并且可以适用于毫克级别的微量、高分离度的样品制备。

18-1.jpg

色谱条件
色谱柱 : TSKgel CM-STAT (4.6mmI.D. x 10cm)
流动相 : A ; 20mmol/L MES (pH6.0)
B ; 20mmol/L MES + 0.1mol/L NaCl (pH6.0)
梯度 : 0min 20% B
30min 50% B
30.1min 100% B
35min 100% B
35.1min 20% B
40min 20% B
流速 : 1.0mL/min
检测 : UV (280nm)
温度 : 25C
进样体积 : 20μL
样品浓度 :1g/L
样品 : Mouse monoclonal antibody (from mouse acites,IgG1)
液相色谱仪 : Agilent 1120 Compact LC (gradient auto system)

18-2.jpg

色谱条件
色谱柱 : TSKgel CM-STAT (4.6mmI.D. x 10cm)
流动相 : A; 20mmol/L MES (pH6.0)
B; 20mmol/L MES + 0. 1mol/L NaCl (pH6.0)
梯度 : 0min 20% B
30min 50% B
30.1min 100% B
35min 100% B
35.1min 20% B
45min 20% B
流速 : 1.0mL/min
检测 : UV (280nm)
温度 : 25C
进样体积 : 20μL
样品浓度 : 2.32g/L
样品 : Mouse monoclonal antibody (from mouse acites,IgG1)
液相色谱仪 :BioAssist eZ-Auto/C
组分收集 : 人工手动收集

18-3.jpg

编辑: gaowei2010    来源:丁香园