从脐带血中分离 CD34+细胞

每个成功的实验都开始于选择正确的细胞。不论您是用经解冻复苏的原代细胞还是从脐带血中分离 CD34+细胞，成功的关键都在于了解您的起始样本。从脐带血中分离 CD34+细胞的重点就在于如何取得较高的纯度和回收率。采样成功与否除了受样本自身的性质所限，也会受脐带血采取过程的各种因素所影响。可能会导致如下结果：

• 样本中 CD34+细胞的含量较低（通常是有核细胞的 0.1～1%）
• 有限的血量
• 样本间的细胞质量和细胞存活能力存有差异

使用 EasySep™ 人脐带血 CD34+正选试剂盒 II（产品号 #17896）您能够得到最高 98% 的 CD34+细胞纯度；与使用分离柱的方法相比，实验所需的时间亦大大减少（请见下方的实验步骤对比）。该试剂盒首先使用 RosetteSep™ 将谱系阳性的细胞去除 ，接着使用 EasySep™ 分离 CD34+ 细胞。 

实验步骤对比：

相比分离柱，使用无分离柱的免疫磁珠分选的优势在于：

• 所需时间更短，特别是对于含有可能堵塞分离柱的死细胞和聚集物的样本。
• 更少的人工操作、洗涤细胞和将 CD34+细胞暴露于缓冲液和活性表面的时间更短
• 能够大大提升纯度和相应的细胞回收率

使用 EasySep™ 人脐带血 CD34+正选试剂盒 II（产品号 #17896） 时，为了得到更优的结果，请参照以下的技术建议：

脐带血样本

• 使用新鲜提取的脐带血样本（最好是在 24 小时以内的）。
• 提取和开始处理样本之间，在室温保存脐带血样本（不要冷藏）。
• 使用抗凝血剂柠檬酸磷酸右旋葡萄糖（CPD）或者枸橼酸葡萄糖（ACD）。避免使用 EDTA。

RosetteSep™ 预纯化处理

• 请将样本缓慢并小心地注入密度梯度离心液上部，应尽量避免样本与离心液在界面相接处混合。
• 在 RosetteSep™ 离心后, 吸出部分血浆以减少血小板污染，注意不要搅动需要提取的细胞界面。

EasySep™ CD34+细胞分离

• 在进行磁珠分离时，弃去上清液之后并在开始下一个步骤前，要确保留在试管中的细胞全部从管壁上脱落并重新悬浮于缓冲液中。轻敲试管壁可帮助细胞从管壁上脱落，之后用 EasySep™ 缓冲液彻底洗涤以得到最高的细胞提取率。

如果想要更多地了解此产品和其他用来分离脐带血中 CD34+细胞的试剂盒，请参见我们的 Technical Bulletin: Isolation of CD34+ Cells from Human Cord Blood。 如果您使用非脐带血样本，我们可以提供其他更多的无需使用分离柱从骨髓和全血中提取 CD34+细胞的方法。如需要更多资讯，请与我们通过电话/邮件联系：400 885 9050 / info.cn@stemcell.com。

这份技术指导已做为我们的 Hematopoiesis Hub 的一部分发表。 请浏览我们的网站来了解更多的关于我们的经典产品和新产品的技术指导，聆听这个领域的专家访谈，或者更多！

编辑： z翟某某    来源：丁香园