使用 TeSR™-E7™ 进行体细胞重编程的技术窍门

体细胞通过暂时性过度表达重编程因子，例如 Yamanaka 因子，生成人诱导多能干（iPS）细胞。传统的重编程条件需要小鼠饲养层和含动物源成分的不确定培养基，而使用无血清、无异种成分的 TeSR™-E7™ 培养基可以优化重编程过程，使之变得更为确定。该培养基配方基于 Wiscosin-Madison 大学的 James Thomson 博士实验室发表的文献。下面是使用 TeSR™-E7™ 重编程成纤维细胞时的两个常见问题和相应的解决方法：

问题 1：成纤维状细胞过度生长

有些时候，小到中等大小的 iPS 细胞集落在诱导阶段产生时，周围可能会出现大量密集的成纤维状细胞（图 1A）。由于在挑选集落前，这些成纤维状细胞会影响 iPS 细胞集落的扩增，因此建议使用 22 号针头或玻璃移液管（pulled-glass pipette）去除一些密集的成纤维状细胞，使 iPS 细胞集落有更多的空间来生长（图 1B）。 

问题 2：什么时候适于挑选克隆？

由于在诱导阶段，iPS 细胞集落形成的速度不同，建议将适合挑选的集落先行收集并转移至 mTESR™1 或 TeSR™-E8™ 中进行下一步扩增和分析。

确定是否挑选集落的最佳方法是依据集落是否具有胚胎干细胞集落形态，包括：
• 集落边界清晰
• 细胞间紧密排列
• 高核质比
• 核仁显著

挑选 iPS 细胞集落时，可先使用 22 号针头或玻璃移液管将周围的成纤维状细胞移开。

注意： 如果 iPS 细胞集落在挑选时开始移位或从培养板上完全脱离，可将整个集落转移到小管中打碎，然后转移到新的培养孔中。若有需要，客户可以将剩余的细胞集落留在原培养板中继续生长后再次挑选。

如需详细的使用 TeSR™-E7™ 和非整合、附加型载体对成纤维细胞进行重编程的实验步骤，请参考我们的技术手册。 

TeSR™-E7™ 和非整合、附加型载体系统已被证实可用来重编程成纤维细胞、经扩增的造血细胞以及间充质干细胞。

如需更多资讯，请通过 info.cn@stemcell.com 随时联系我们。

编辑： z翟某某    来源：丁香园