脑类器官生长培养基

STEMdiff™ 脑类器官试剂盒（产品号 #08570）

——构建和成熟人脑类器官的细胞培养试剂盒

STEMdiff™ 脑类器官试剂盒为无血清培养系统，设计用于从人胚胎干细胞（ES）和诱导多能干细胞（iPS）生成脑类器官，基于 MA Lancaster 和 JA Knoblich 发表的配方研发。培养 40 天后，这些脑类器官具有层次分明的祖细胞群，并产生成熟神经元，与在早期发育中人脑皮质层的观察结果相符。

STEMdiff™ 脑类器官试剂盒的优势

◆ 生理相关。三维体外系统可重现脑发育过程和发育中的脑结构。

◆ 创新。基于无血清人多能干细胞的模型可实现对脑发育和疾病过程的研究。

◆ 优化。为了提升类器官的形成效率，对配方进行了优化。

◆ 可靠。严格的原材料筛选和广泛的质控测试确保了高度的重复性和最小的批次间差异性。

◆ 简单。试剂盒成分简单，操作方便。

图 1. STEMdiff™ 脑类器官试剂盒的示意图
将在 mTeSR1™ 中维持培养的人多能干细胞（胚胎干细胞或诱导多能干细胞）使用温和细胞解离试剂（GCDR）解离为单细胞悬液，以密度为 9000 细胞/孔接种至 U-Bottom 96 孔超低粘附培养板（Corning^®）中，接种培养基为 EB 形成培养基 + 10 μM Rho-kinase 抑制剂（ROCKi）。每隔 2 天更换为不含 ROCKi 的 EB 形成培养基。5 天之后，将 EBs 转移到含有诱导培养基的 24 孔超低粘附培养板（Corning^®）中。对 EB 培养 2 天后，使用液体 Matrigel^®（减少生长因子，Corning^®）包被 EBs。接下来将它们转移到经过无组织培养处理的 6 孔板（12～16 类器官/孔）中。嵌入的类器官在扩张培养基中维持培养 3 天。在第 10 天时，将类器官转换到成熟培养基中，然后放置在 RPM 为 57-95 的定轨摇床（Infors HT）上对其进行培养。在成熟培养基中，每 3-4 天进行换液。在第 40 天时，类器官进行 RT-qPCR 分析或冰冻切片后进行免疫染色。EBs 形成、诱导和类器官扩张的比例尺 = 300 μm。类器官成熟的比例尺 = 1 mm。

图 2. 对使用 STEMdiff™ 脑类器官试剂盒生成的脑类器官进行鉴定
（A）使用 STEMdiff™ 脑类器官试剂盒生成的整个脑类器官（第 40 天）于相差显微镜下的代表性图像。这一时期的脑类器官具有暗相衬结构，且该结构周围可能是更薄更透明的、显示分层的区域（箭头所示）。（B）在对脑类器官冰冻切片进行免疫组化分析时，通过顶端祖细胞标志物 PAX6（红色）和神经元标志物 III 类β-微管蛋白（TUJ-1）（绿色），显示出类器官内部的皮质区域。（C-F）对（B）划线区域的放大图像。（C）PAX6+ 顶端祖细胞（红色，虚线之内）位于脑室带样区域。III 类β-微管蛋白 + 神经元（绿色）位于该脑室带附近。（D）CTIP2（即发育中皮质板的标志物）与 III 类β-微管蛋白 + 神经元共同位于皮质板样区域。各层结构重现了在人脑发育中观察到的早期脑皮质发育。（E）被 Ki-67（绿色）标记的增殖祖细胞沿脑室带分布，细胞核被 DAPI 复染（蓝色）。（F）在外脑室下区状区域中发现了额外的 Ki-67+ 细胞群（箭头所示）。比例尺：（A）1 mm、（B）500 μm、（C-F）200 μm。

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编辑： z翟某某    来源：丁香园