实时定量聚合酶链反应 (Quantitative Real-time PCR,qPCR) 是一种分子生物学技术,用于放大和同时检测或量化靶向 DNA 分子。程序遵循 PCR 的一般原则。在 PCR 反应过程中,随着循环次数的增加,PCR 产物的积累导致荧光信号的增强。因此,通过监测荧光强度,在" 实时" 中检测到 PCR 反应的进展。
科学研究中较为常用的是 SYBR Green qPCR 和 TaqMan 探针 qPCR。
实时定量 PCR 服务内容-定性和定量的基因表达分析
1. 定性分析:检测病毒; 检测转基因; 确定品种; 突变基因分型 | 2. 相对定量分析:参考基因和靶基因表达分析 |
图 1. 用 SYBR Green qPCR 法分析转入人 IL6 基因的小鼠 | 图 2. 样本中内参基因和靶基因的表达分析 |
3. 绝对定量分析:DNA(RNA) 的绝对定量分析; 转基因拷贝数测定; 病毒和病原量化 | 4. 单核苷酸多态性分析:人类疾病分析; 个性化医疗; 人力资源管理分析 |
图 1. 用 SYBR Green qPCR 法分析转入人 IL6 基因的小鼠 | 图 2. 样本中内参基因和靶基因的表达分析 |
实时定量 PCR 分析服务平台:SYBR Green 和 Taqman 探针 qPCR
定量 real-time-PCR(qPCR) 如 TaqMan 和 SYBR Green qPCR 检测被广泛用于基因表达分析,两种方法的特点如下:
SYBR Green | Taqman 探针 | |
优点 | • 操作简单 • 价格较低 • 更适合于相对 qPCR | • 更强的特异性 • 可进行多重 qPCR • 更适合于绝对 qPCR |
缺点 | • 精度略低 • 特异性低于 Taqman 探针法 • 无法进行多重 qPCR | • 价格更高 • 操作复杂 |
实时定量 PCR 分析服务平台优势
▶ Sino biological 为您提供 SYBR Green 染料法和 TaqMan 探针法,根据您的科研需求进行基因表达分析。通过实时定量 PCR 技术可以完成定量分析、相对定量分析或绝对定量分析
▶ Sino biological 大约有 1 万个基因质粒,具有高质量和经过验证的引物对,提高了检测效率
▶ Sino biological 还拥有一批经验丰富的技术人员,他们设计 qPCR 检测方案,并提供实验服务
实时定量 PCR 分析服务说明
服务内容 | 周期 | 交付内容 |
SYBR Green dye 法 | 1-2 周 | • 分析报告 • 剩余引物 |
• 引物设计与合成 • qPCR 检测 • 数据分析 | ||
TaqMan 探针法 | 3-5 周 | • 分析报告 • 剩余引物及探针 |
• 引物设计、合成与优化 • 探针设计与合成 • qPCR 检测 • 数据分析 |
在此项实时定量 PCR 分析服务中,客户需要提供:
目的基因名称、NCBI 编号及合格的 DNA/cDNA 待测样品
实时定量 PCR 分析服务成功案例
案例 1:用 SYBR Green qPCR 方法检测人体组织中 cDNA 的 45 个基因的检测结果。 | |
图 1. 以人组织 cDNA 为模板,45 个基因的扩增曲线 | 图 2. 以人组织 cDNA 为模板,45 个基因的溶解曲线 |
案例 2:一对基因引物的质检报告 (包括标准曲线)。 | |
图 3. SDHA 标准样品的扩增曲线 | 图 4. SDHA 的标准曲线和扩增效率 |
案例 3:下面实验采用 7 种人癌细胞的 cDNA 作为模板,联合 qEASY qPCR 引物进行了 SYBR Green 定量检测。由表可以分析得到,GAPDH 的表达水平是最高的,SDHA 的表达水平是最稳定的。 |