HTRF（均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。该技术结合了荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）两种技术。HTRF是基于TR-FRET的化学技术，拥有与其它TR-FRET技术相似的特征，HTRF技术的能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）具有非常长的半衰期，很大的Stroke's shift等。HTRF数据分析方面，有来自于能量供体和能量受体的两个发射光，可采用Cisbio专利的比值法来分析数据，从而去除由于溶液通透率、细胞大小、细胞数量等不同引起的误差。>>详细内容

HTRF技术的优势

•       操作非常简单  实验过程不需要繁琐的洗板，只需要混匀孵育后检测

•       体系非常稳定 穴状化合物非常稳定，可耐受较宽的pH范围、二价金属离子、螯合物等，并且可以在至少48小时内反复多次检测

•       数据真实可靠  背景低，受到样品的干扰非常少，假阳性假阴性均低，尤其可去除由于天热产物自发荧光等引起的干扰

•       应用灵活多样  HTRF可以看作是不需洗涤的ELISA，应用范围很宽

•       易于实现微型化，通量高

HTRF技术从产生以来，已经被广泛应用于免疫检测和细胞信号转导的研究，在药物研发中被应用于不同的阶段，从实验方法的建立、高通量筛选（HTS），lead到hit，一直到临床前研究。HTRF技术非常灵敏而且稳定，可以进行细胞实验和生化实验，并且可以使用384和1536孔板。HTRF的很多应用是基于抗体的检测，包括GPCR（受体配体结合，受体二聚化，cAMP 和IP-1 的检测，以及磷酸化ERK和AKT的定量）、激酶、细胞因子和生物标志物、生物过程（治疗性抗体和蛋白药物的生产）等，以及蛋白和蛋白、蛋白和多肽、蛋白和DNA/RNA相互作用的研究。HTRF具有与ELISA同等的检测范围和检测极限，但是它不需要洗板，可以极大地减少实验时间，所以HTRF技术可以取代大部分ELISA实验，为均相ELISA。>>查看详情

G蛋白偶联受体的解决方案

HTRF技术可用来进行第二信使检测、胞内信号分子检测和受体配体结合检测方案，从而从全方位帮助您进行G蛋白偶联受体的研究。>>查看详情

HTRF激酶检测解决方案

HTRF KinEASETM利用标记了镧系元素Eu3+的特异性磷酸化位点的单抗以及XL665标记的链霉亲和素跟生物素化的底物形成夹心实验。整个实验包含两步：

• 酶反应步骤:激酶在有或者没有化合物的条件下跟特异的底物混合，加入ATP起始反应。
• 检测步骤:加入用检测缓冲液配置的单抗-Eu3+和XL665，在检测缓冲液中含有EDTA，因此能够终止激酶反应。以上两种检测试剂可以先混合以减少加样步骤。

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HTRF细胞因子检测

HTRF细胞因子检测是基于双抗体夹心法（见图2），包括两个单克隆抗体（MAb）：铕标记的抗细胞因子抗体MAb1和XL665标记的抗细胞因子抗体MAb2。MAb1和MAb2分别与细胞因子结合，发生能量共振转移，产生荧光信号，荧光信号与细胞因子的浓度成正比。>>查看详情

HTRF生物过程和抗体药物研发解决方案

在治疗性抗体的研发和筛选过程中，通常需要经过以下步骤：首先基于生物化学结合反应，利用HTRF或ELISA技术从几千至上万的样本库中筛选目标候选样本。在确定候选样本可以与表面受体结合后，进一步从细胞水平确定候选样本与细胞的结合能力。随后，确定候选样本的Kd，Kon/off 和 IC50值，对抗体药物的亲和力等特性进行确定，最后一步是进行抗体药物的功能试验，如抗体药物激活细胞表面受体后，cAMP和IP-One的表达水平等等。

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说说你对Elisa的爱恨情仇

ELISA技术从上世纪60年代提出至今，已有半个世纪的历史。目前该项技术在生化分析、生物医药等领域得到广泛应用。其后，各种基于ELISA的改进或创新技术也层出不穷，比如诞生于上世纪90年代的HTRF技术就是其中之一。

时至今日，ELISA作为传统的检测方法，既有经典，也有不足。作为ELISA亲历之人的你，来说说你做ELISA的甜酸苦辣，扒扒你对

ELISA的爱恨情仇吧！

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