CST 的抗体如何做到让全球科研工作者认可的？

同一个抗体在几次平行实验里得到的结果不同，将会产生灾难性的结果。CST 自 1999 年成立以来，一直以提供最高质量抗体为使命，进行严格的内部验证，确保在售的每一支抗体都获得最可信和可重复的结果。

下面让我们一起看看 CST 最高质量的抗体是怎样炼成的，没准，你可以通过这严谨的验证方法，Get 到科研新思路呢。

CST 抗体验证原则：
I. 确保特异性
II. 确保灵敏度
III. 确保批次间一致性
IV. 提供优化后的稀释比例、实验步骤、配套试剂等

我们进行严格的内部验证的最终目的，就是帮助用户以最少的时间、样本和试剂获得最可信和可重复的结果！

I. 确保抗体特异性。

1. 用细胞或组织的阳性和阴性对照检测抗体是否特异

注：HT-29 细胞有 EpCAM 的表达，而 Hela 细胞没有

2. 抗体检测到的靶点是否具有正确的亚细胞定位

注：AIF 通常定位于线粒体的间隙，应答凋亡刺激而释放；EEA1 是一个早期内涵体标志物，也是 Rab5 效应蛋白，对内涵体膜融合和转运至关重要；在分泌蛋白合成过程中，PDI 转位到内质网（ER）中进行翻译后修饰和正确折叠；Syntaxin6 是一个广泛表达的 SNARE 蛋白 S25C 家族成员, Syntaxin6 蛋白定位于反面高尔基体和内体内，通过参与多种 SNARE 蛋白活动调节膜转运; 紧密连接或闭锁小带 ZO-3 是周围衔接蛋白，此蛋白连接接合性跨膜蛋白（比如 occludin 和 claudin）到肌动蛋白细胞骨架; 细胞骨架由三种类型的细胞质基质纤维组成：微管、微丝 (肌动蛋白纤维) 和中间纤维。球形微管蛋白亚基包含微管建筑块，由α/β-tubulin 异源二聚体形成所有真核细胞的 tubulin 亚单位。

3. 抗体检测到的靶点是否在组织特异性表达

注：piwi 基因被鉴定是生殖系干细胞自我更新所必须的，Miwi 和 Mili 蛋白都是小鼠 Piwi 同源物，在睾丸组织中特异性表达；神经胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和钙结合蛋白（Calbindin）在小脑组织特异性表达。

注：抗体的性能在相关小鼠癌症模型上进行评估，Phospho-Akt(Ser473) (D9E)XP® Rabbit mAb#4060 在小鼠前列腺癌中高表达，在正常组织中不表达

4. 使用特异性配体、抑制剂处理细胞或调控细胞生长环境，检测待测抗体

● 翻译后修饰调控
● 高表达或低表达
● 亚细胞易位

注：EGF 是 EGFR 的配体（Ligand）。A549 细胞中，EGF 处理后，EGFR 会发生易位。YAP 在低融合度和高融合度 MCF10A 细胞中的表达分布差异。

注：用适当的激酶激活剂和/或抑制剂处理后细胞样品，检验待测抗体

5. 检测抗体是否适于多种应用 (WB, IP, IHC, ICC, flow,IF,ChIP,ChIP-Seq 等)

注：我们会对待测抗体进行不同应用的检测。

6. siRNA,CRISPR, 或 knockout 细胞或组织，检测待测抗体

注：A.SiRNA 干扰，WB 分析检测 Beclin-1(D40C5) XP® Rabbit mAb #3495 蛋白变化。B. 采用 crisper-cas9 对细胞进行基因敲除，验证抗体对靶标蛋白的特异性，该产品因有非特异性条带，不达标而被淘汰;C. 在支气管内皮细胞特异性敲除 RBPSUH 蛋白，用待测抗体检测变化。

7. 多肽芯片分析确保组蛋白抗体的特异性

注：CST 多肽芯片可在单次实验中检测抗体与所有组蛋白中已知修饰的交叉反应，同时评估临近修饰对抗体检测单个修饰位点的影响。经过以上多肽芯片检测，进一步评估了抗体与组蛋白的所有已知位点和邻近位点修饰是否有交叉反应，从而保证了抗体识别单一修饰位点的特异性。

8. 与其他公司的抗体进行性能比较

注：与其他产品进行对比分析

9. 免疫共沉淀分析蛋白之间相互作用

注：通过免疫共沉淀，用蛋白与蛋白之间相互作用进一步检测待测抗体

10. 用磷酸酶处理后的样本，检测待测磷酸化抗体

注：磷酸酶处理后，可区分抗体是否能与磷酸化蛋白特异性结合。用磷酸酶处理肺癌细胞后，cdc25C（Ser216）的磷酸化消失

11. 检测 SiRNA 干扰后、本底表达和过表达水平的样本中靶蛋白变化

注：SiRNA 干扰、本底表达和过表达靶蛋白的细胞中，染色检测变化

12. 用抗原封闭肽阻断抗体后再检测样本

注：只有特异性抗体才能被抗原封闭肽彻底中和阻断检测信号，由此确定抗体特异性

抗体特异性是抗体的根本。试想，如果抗体的特异性无法保证，针对某个靶点的研究还有意义吗？正因为 CST 深谙抗体特异性的重要性，所以才会穷尽以上方法来进行交叉验证，确保抗体特异性。

II. 确保抗体灵敏度

√ 滴定法测定抗体的最佳浓度

注：经反复验证，Phospho-Akt (Ser473)Rabbit mAb #4058 在箭头所示浓度达到最大检测信噪比。CST 以此作为推荐抗体最佳稀释比例的依据。

√ 在高、中和低表达组织或细胞中检测

√ 同型对照: 比较待测抗体与同型对照，确保可接受的信噪比

注：Rabbit (DA1E)mAb IgG XP® Isotype Control #3900:  流式分析 SH-SY5Y 细胞，使用 CREB (D76D11)Rabbit mAbAntibody #4820(蓝色)，与同型对照抗体#3900(红色) 进行比较。

III.   批次间测试：新批号与老批号进行平行比较，确保批次间的一致性。

√ 新老批次间各种应用的检测，确保后一批次的质量优于前一批次，或者至少要与前一批次相当，否则不予上市

√ 不同批次抗体，稀释相同的倍数，需检测到相同的信号强度

注：免疫印迹分析 Hela 细胞，未经过 IFN-α处理或经过 IFN-α处理，比较 Phospho-Stat3(Tyr705)(D3A7) XP® Rabbit mAb #9145 的 Lot1，Lot2，Lot3 和 Lot8。注意：批次间的信号保持高度一致。（推荐的免疫印迹稀释浓度从 Lot3 开始，改为了 1：2000）
Lot1:2006 年 1 月；Lot 2:2007 年 6 月；Lot 3:2008 年 10 月；Lot 8:2009 年 4 月

IV.   提供优化后的稀释比例、实验步骤、配套试剂等

包括：

a.  经测试优化后的稀释条件和缓冲液

b.  经测试过的阳性和阴性对照细胞裂解液样品

c. 经优化过的详细操作步骤

IV. Best Customer Service 技术支持

CST 中国技术支持均为国内、外知名高校博士，发表过高水平文章。CST 的卓越技术服务已被全球客户认可，2015 年被 Biocompare  评选为全球 No.1 Technical Support, 2016 年被 LSIA 评选为「Best Customer Survice」等。

CST 科学家在 Cell、Nature 等杂志发表多篇文章，正是生产这些抗体的 CST 科学家为客户提供技术支持，帮助他们设计实验，解决问题以获得最可靠的结果！

以上，只是 CST 抗体研发、生产过程中抗体验证的冰山一角，但足以表明 CST 对待抗体质量的态度。也正因此，CST 收获无数的抗体粉丝，在第三方机构进行调研时，被全球的科学家认可。连续两届被评为 LSIA 之 Best Antibodies（业界唯一一家获此殊荣的公司），连续三届获 CiteAb 之 Researchers' Choice（业界唯一一家收获研究人员至高信任的公司），获评 Biocompare 5 个（抗体特异性、灵敏度、重复性、技术支持、网站有用性）第一……

编辑： z翟某某    来源：丁香园