常规的细胞增殖检测技术

细胞是以分裂的方式进行增殖的。单细胞生物，以分裂的方式产生新个体。多细胞生物，以分裂的方式产生新细胞，从而补充体内衰老或死亡的细胞，有丝分裂是真核生物进行细胞分裂的主要方式。细胞增殖是生物体生长发育、繁殖遗传的基础，所以对细胞增殖的检测一直是一大研究热点。

常规细胞增殖检测技术包括以下几种：

（1）标志蛋白的 WB 检测等。

PCNA（Proliferating Cell Nuclear Antigen）是增殖细胞相关的核抗原，在 DNA 复制以及细胞增殖的启动中起重要作用。Ki67 也是一种细胞增殖核抗原，在有丝分裂中维持 DNA 结构的稳定性，在细胞周期 G0 期无表达，G1 期开始表达，S 期和 G2 期表达量逐渐升高，M 期表达量最高，有丝分裂结束后则降解消失。WB 实验可对 PCNA 或 Ki67 的表达水平进行检测，从而间接得知细胞增殖情况。

优势：简便性，广泛性，无组织特异性。

劣势：间接反映细胞增殖的情况。

（2）EdU 检测

EdU （5-乙炔基-2』脱氧尿嘧啶核苷）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，在细胞增殖时能够插入正在复制的 DNA 分子中。基于 EdU 与荧光染料的特异性反应检测 DNA 复制活性。现多用 EdU 检测替代 BrdU 检测。

优势：体外实验，检测灵敏度高，可与多种抗体或荧光蛋白同时标记。

劣势：具有毒性。

（3）CFSE 检测法

羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种荧光染料，可穿透细胞膜，进入细胞后不可逆的与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上，细胞分裂时，标记荧光平均分配至 2 个子代细胞中，荧光强度是亲代细胞的一半。利用流式细胞仪的 488nm 激发光检测。

优势：直接法，活细胞检测。

劣势：CFSE 浓度太低，荧光强度不够；浓度太高，毒性影响细胞增殖。

（4）CCK8 检测法。

CCK8 检测法是 MTT 检测法的升级版。CCK8 检测试剂中含有 WST-8，WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，可被线粒体内的脱氢酶还原生成水溶性的甲臜。细胞增殖越多越快，颜色越深。酶联免疫检测仪测定 450nm 吸光度。

优势：简便，结果直观，活细胞检测。

劣势：间接反映活细胞数量。CCK8 试剂颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色相近，不注意的话容易漏加或多加。

云克隆公司现推出了活性蛋白产品，活性蛋白对细胞增殖影响的检测，我们多采用的是 CCK8 检测法结合镜检观察。如表皮生长因子活性蛋白（APA560 Hu02），其浓度升高后，可刺激 3T3 细胞增殖，结果如下：

编辑： dxy_8hxjask7    来源：丁香园