一种快速确定流式单细胞孔板分选效率的方法

试剂：
1.TMB (BioLegend PN421501) 4 ℃ 避光保存；
2.HRP (Life Technologies PN31490) -20 ℃ 保存；3.1×PBS；

仪器：Sony SH800S 智能全自动流式细胞分选仪

创新微流体芯片液流系统
全自动化校准，免除人为调试
样本全部流路均易于更换
1 分钟插拔式更换，可实现样本之间零交叉残留
可配备多达 4 根激光 (405/488/561/638)
覆盖所有常见荧光染料
3 种规格芯片 (70 μm/100 μm/130 μm)
充分满足研究者对不同大小细胞的分选需求
单细胞分选及索引分选功能
便于对目标单个细胞追踪溯源

步骤：

1. 96 孔板每孔加入 2 μl TMB，或者 384 孔板每孔加入 1 μl TMB，体积取决于实验需要用到的孔板类型，也可依据正式的实验体系灵活放大；

2.  制备细胞样本（最好使用正式实验将用到的细胞样本），参考流程如下；
a)  把 500 µl 细胞悬液加到 1.5 ml EP 管里；
b) 500×g 离心 4 分钟；
c)  移去上清，500 μl 1×PBS 重悬；
d) 500×g 离心 4 分钟；
e)  移去上清，375 µl 1×PBS 重悬；
f)  把 125 µl HRP 加到细胞重悬液中，终浓度为 250 µg/ml。

3. 校准并设置 Sony SH800S 流式细胞分选仪。通过 Sorting Test 各分选 20 个液滴到板盖 4 角的孔上，检查是否对准孔正中心位置，如果没有对准，做必要的孔板位置调整；

4. 分选细胞到提前准备的含有 TMB 的孔板中，每孔 1 个细胞；

5. 分选完成后立即离心孔板，以确保分到的液滴与孔中的 TMB 溶液混合；

6. 5-10 分钟后计数孔板中颜色变蓝的孔的个数并统计百分比，正常状态下效率应当超过 90%；此外，颜色深浅与分选到孔中的细胞数量成正相关。

▊  结果显示

良好
96 孔板分选效率>95% 

384 孔板分选效率>95%

较差 
96 孔板分选效率<30%

▊  结论

本文成功展示了一种简单方法，能够帮助实验者在预实验时快速确认单细胞孔板分选的效率，避免浪费样本和检测试剂，确保实验成功机率。

该方法能够非常灵敏的检测单个液滴，既可以在无需任何其他设备情况下，直观的获取颜色变化结果；也能够借助酶标仪对显色反应进行液滴定量。

▊  参考来源

1. 牛津大学基因组中心；

2. A Rapid Method to Verify Single-Cell Deposition Setup for Cell Sorters.OliviaRoosRodrigues,1 Simon Monard2* Cytometry Part A 89A: 594600, 2016

图片来源：索尼生物