心肌细胞毒性检测原理、步骤及实验结果
RTCA技术简介:
原理:实时无标记动态细胞分析技术(RTCA,Real Time Cellular Analysis)是通过特殊工艺,将微电子细胞传感器芯片整合到细胞检测板的底部,用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化等改变的细胞阻抗检测传感系统。当贴壁生长在微电极表面的细胞引起贴壁电极界面阻抗的改变时,这种改变与细胞的实时功能状态改变呈相关性,通过实时动态的电极阻抗检测可以获得细胞生理功能相关的生物信息,包括细胞生长、伸展、形态变化、死亡和贴壁等。
RTCA技术心肌细胞毒性检测实验步骤:
1、用Gelatin包被Cardio Plate 检测板,将包被好的检测板 置于4 ℃ 过夜。
2、移去E-Plate Cardio 检测板中的包被液,加入培养基。
3、将检测板放入检测台上(检测台已预先放入CO2培养箱中),测定背景阻抗值。
4、收集细胞并计数,调整细胞悬液浓度,向检测板中加入一定体积的细胞,室温超净台内放置30min。
5、将检测板重新放入检测台上,进行实时动态的心肌细胞生长检测。
6、培养24小时后,更换新鲜培养基。
7、继续培养至38~40小时后,再次更换培养基。
8、2小时后,进行药物处理。向各细胞培养孔中加入配制好的梯度药物,即可获得实时动态的心肌细胞跳动曲线。
RTCA实时无标记技术心肌细胞毒性检测实验流程:
技术特点:
1、实时、灵敏并定量地检测心肌细胞的搏动功能,以及离子通道及非离子通道调节剂的心肌细胞调节作用。
2、高通量的心肌律动检测(一次可检测96个样品)。
3、对细胞效应进行短期(毫秒)及长期(天或周)监测。
4、无标记、非侵入性细胞动力学分析。
典型的利用RTCA技术获得的心肌细胞毒性检测结果:
典型的hERG通道抑制剂所引起的心肌细胞心律不齐现象,直接定量药物的心脏毒性