实验步骤对比
RTCA技术病毒或细菌毒素等微生物检测实验步骤:
1、向E-Plate检测板中加入培养基并测定背景阻抗值。
2、收集对数期细胞并计数,调整细胞悬液浓度,向E-Plate检测板中加入一定体积的细胞,室温超净台内放置30min。
3、将加入细胞的E-Plate检测板放入检测台上(检测台预先放入培养箱中),进行实时动态的细胞增殖检测。
4、过夜检测后,向各培养孔中加入不同稀释滴度的病毒或不同浓度的细菌毒素并继续进行实时动态检测, 即可获得病毒或细菌毒素对细胞产生的效应曲线。
应用RTCA技术对病毒或细菌毒素引起的细胞响应检测示意图:
特点:
1、实验操作简单,步骤少,人为干扰小。
2、完整细胞效应图谱,提供大量、重要的动态反应信息。
3、实验结果客观,重复性好。
4、降低了操作人员与病毒/细菌毒素接触的次数(实验全过程仅需一次),安全系数高。
5、全自动实时监控,全过程动态观察。
空斑形成实验基本实验步骤:
1、以一定密度接种细胞到细胞培养板中,置于5% CO2、37℃培养箱培养。
2、待细胞长成单层后(通常小于48小时)移去培养基,每孔加入400ul的PBS和100ul梯度稀释的毒液。
3、培养箱中吸附1-4小时。期间每隔15~30分钟摇晃细胞培养板1次以令病毒分布均匀。
4、弃去吸附液,每孔添加覆盖层3ml(注意控制覆盖层的温度不能过高以免伤害细胞)。
5、37度孵育6~7天。
6、每孔添加约2ml的1%福尔马林,固定过夜使之充分渗透过覆盖层,固定时间24小时以上。
7、剔除覆盖层,用自来水冲洗平板边缘残留的琼脂糖。
8、每孔添加2~3ml的中性红,室温染色1~24小时,吸掉染液,轻柔地清洗并打开盖子令其干燥后保存。