共培养实验步骤对比
RTCA技术细胞间相互作用(共培养)实验步骤:
1、E-Plate检测板加入培养基并测定背景阻抗值。
2、E-Plate检测板中加入靶细胞,室温放置30min,放入检测台(已预先放入CO2培养箱中)进行细胞增殖的实时动态检测。
3、CCD receiver plate中加入培养基,放入Insert后加入效应细胞,将receiver plate放入CO2培养箱中培养。
4、过夜培养后,用receiver plate中的培养基将Insert 补满,将Insert放入E-Plate检测板中,即可获得细胞共培养的实时动力学曲线。
RTCA实时无标记技术细胞间相互作用(共培养)实验检测流程:
特点:
1、实验操作简单,步骤少,人为误差小。
2、采用无标记方法,不存在标记效率问题,并且对细胞无损伤,细胞在最接近生理状态下进行检测,结果准确度高。
3、实验结果客观,重复性好。
4、完整细胞效应图谱,提供大量、重要的动态反应信息。
5、实验数据自动获取。
Transwell细胞间相互作用(共培养)基本实验步骤:
1、效应细胞接种到transwell小室中,培养24小时。
2、靶细胞接种到细胞培养板中,培养24小时。
3、过夜培养后,将transwell小室和培养板中的培养液除去,下室加入新的培养液。
4、将transwell小室放入细胞培养板中并加入新的培养液,培养48-72小时后进行检测。
5、取出transwell小室,吸出细胞培养板中的培养液。
6、PBS洗涤细胞培养板两次,4%多聚甲醛固定细胞。
7、免疫荧光检测法对细胞拍照。
8、选取5-10个视野计数。
也可应用MTT方法酶标仪上测OD值。