迁移及浸润实验步骤对比
RTCA技术细胞迁移及浸润实验步骤:
1、取出CIM Plate检测板,上室包被一定浓度的matrigel,CO2培养箱中放置约4小时。(细胞浸润实验所需,迁移实验无此步骤)
2、下室加入含血清或其它趋化因子的培养基,以加入无血清的培养基为对照。上下室装配后,上室中加入无血清培养基并在CO2培养箱中平衡1小时。
3、将CIM Plate检测板放入检测台上(检测台已预先放入CO2培养箱中),测定背景阻抗值。
4、将一定浓度梯度的细胞接种到CIM Plate检测板的上室里,室温放置半小时。
5、将CIM Plate检测板放入检测台上,即可获得细胞迁移或浸润的实时动力学曲线。
RTCA实时无标记技术细胞迁移及浸润实验检测流程:
特点:
1、实验操作简单,步骤少,人为误差小。
2、采用无标记方法,不存在标记效率问题,并且对细胞无损伤,细胞在最接近生理状态下进行检测,结果准确度高。
3、实验结果客观,重复性好。
4、实验数据自动获取,并可轻松获得两个不同时间点的IC50或EC50。
5、可一次检测多个细胞接种浓度,时间耗费少,费用低。
6、完整细胞效应图谱,提供大量、重要的动态反应信息。
Transwell细胞迁移及浸润(侵袭)实验步骤:
1、Transwell小室制备(细胞浸润实验所需,迁移实验无此步骤)
(1)包被基底膜
(2)水化基底膜
2、制备细胞悬液,具体细胞密度需要通过多次实验自己摸索。
3、细胞接种到transwell小室中,含趋化因子的培养基加入细胞培养板中。
4、细胞培养12-48小时(主要依癌细胞迁移及侵袭能力而定)。
5、结果统计:
(1)直接计数法:
A.用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
B.染色:常用染色方法有结晶紫染色、台盼兰染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色。
C.细胞计数:选取5-10个视野计数。
(2)间接计数法:
A.用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
B.细胞培养板中加入含0.5mg/ml MTT的培养基,将小室置于其中,膜浸没在培养基中,37℃ 4小时后取出。
C. 加入DMSO,将小室置于其中,使膜浸没在DMSO中,振荡10分钟,使甲臜充分溶解。取出小室,酶标仪上测OD值。