实验步骤对比
RTCA技术G蛋白偶联受体检测(GPCR assay)检测实验步骤:
1、向E-Plate检测板中加入培养基并测定背景阻抗值。
2、收集对数期细胞并计数,调整细胞悬液浓度,向E-Plate检测板中加入一定体积的细胞,室温超净台内放置30min。
3、将加入细胞的E-Plate检测板放入检测台上(检测台预先放入培养箱中),进行实时动态的细胞增殖检测。
4、过夜检测后取出E-Plate检测板,吸出培养基并补加无血清培养基,检测板放入检测台上继续检测2小时。
5、取出E-Plate检测板,向各培养孔中加入配制好的梯度药物并继续进行实时动态检测, 即可获得实时动态的细胞效应曲线。
RTCA实时无标记技术受体配体检测实验流程:
特点:
1、实验操作简单,步骤少,人为误差小。
2、采用无标记方法,对细胞无损伤,细胞在最接近生理状态下进行检测,结果准确度高。
3、实验结果客观,重复性好,不需设置重复孔(实验操作需规范,如有特殊要求也可设置重复孔)。
4、完整细胞效应图谱,提供大量、重要的动态反应信息。
5、可便利地捕捉受体配体相互作用的短时变化。
cAMP环磷酸腺苷活性检测实验步骤:
1、标准品的稀释。
2、分别设置空白孔、标准孔和待测样品孔。按照实验设计将稀释好的标准品、待测样品及空白对照加入酶标包被板中。
3、封板膜封板后,将酶标板置于37℃孵育30分钟。
4、配制洗涤液。
5、小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干后每孔加满洗涤液。
6、静置30秒后弃去洗涤液,重复操作5次。
7、每孔加入酶标试剂。封板膜封板后,将酶标板置于37℃孵育30分钟。
8、小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干后每孔加满洗涤液。
9、静置30秒后弃去洗涤液,重复操作5次。
10、每孔先加入显色剂A,再加入显色剂B。37℃避光显色15分钟。
11、每孔加入终止液。
12、以空白孔调零,450nm波长测量各孔的吸光度(OD)值。
13、根据标准品的测定结果绘制标准曲线。
14、根据待测样品的OD值与标准曲线对照,即可得出待测样品的浓度。