实验步骤对比
RTCA技术检测抗体依赖细胞介导的细胞杀伤作用(ADCC)实验步骤:
1、向E-Plate检测板中加入培养基并测定背景阻抗值。
2、收集对数期的靶细胞并计数,调整细胞悬液浓度,向E-Plate检测板中加入一定体积的细胞,室温超净台内放置30min。
3、将加入细胞的E-Plate检测板放入检测台上(检测台预先放入培养箱中),进行实时动态的细胞增殖检测。
4、过夜检测后,向各培养孔中加入NK细胞及配制好的梯度抗体并继续进行检测, 即可获得实时的细胞效应曲线。
应用RTCA技术对抗体依赖细胞介导的细胞杀伤(ADCC)作用检测示意图:
特点:
1、实验操作简单,步骤少,人为误差小。
2、采用无标记方法,对细胞无损伤,细胞在最接近生理状态下进行检测,结果准确度高。
3、实验结果客观,重复性好。
4、完整细胞效应图谱,提供大量、重要的动态反应信息。
5、实验数据的自动获取。
6、可实现时间量效检测。
乳酸脱氢酶释放法基本实验步骤:
1、收集对数生长期的靶细胞并计数,按一定浓度接种到细胞培养板中。细胞于培养箱中培养。
2、收集效应细胞并计数,根据实验设计,按照一定的效靶比加入效应细胞并于培养箱中培养2小时。
3、2小时后,1000rpm离心5分钟,取100ul上清液移入新孔内,37℃孵育10分钟。
4、每孔加入100ul LDH底物,室温避光15分钟。
5、加入1mol/L 柠檬酸,30ul/孔。
6、酶标仪测定OD570nm的吸光度值。