表达质粒转换的操作程序

1、材料及仪器：

• E. coli BL21(或 ROSETTA) 菌株 氯霉素 氨苄青霉素 质粒 DNA LB 固体培养基 培养皿 琼脂粉

• 恒温培养箱，无菌工作台，低温冰箱， 恒温水浴锅， 制冰机，微量移液枪

2、操作程序：

• 从-80℃ 冰箱中取出感受态细胞悬液 (BL21 或 ROSETTA)，立即至于冰上解冻。

• 下午 2 点半加入质粒 DNA 溶液（体积 2u_l）轻轻摇匀，冰上放置 30 min（每 10 分钟拿出来晃一次）。

• 42℃ 水浴中热击 60S，热击后迅速在冰上冷却 5 min。

• 将上述菌液摇匀后取出用烧好的三角玻璃棒涂于（含对应抗生素）的固体培养基上，正位置培养皿于 37℃ 培养基中，第 2 天上午 9 点取出。

注意事项：

• 感受态取出后，剩下的应立即放回冰箱

• 注意水浴锅温度稳定和热击时间 

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编辑： zhuq    来源：丁香园