最近一直在逛 dxy 的论坛,看看好多宝宝关于原代提取中都有疑问,这个是我们实验员在做原代脑微血管内皮细胞(BMEC)时,我这边做的一个实验记录及分离步骤,仅仅供大家参考。 一、实验材料: SD 大鼠(4~6 周龄,雄性),大号手术剪,镊子,50 ml 离心管,6 孔板,75% 乙醇,生理盐水,胶原酶,25% BSA,多聚赖氨酸,DMEM/F12 基础培养基,DMEM/F12 完全培养基 二、实验仪器: 超净工作台,低速离心机,二氧化碳培养箱 三、实验步骤: 1. 将大鼠对大鼠实行 anlesi,浸泡在 75% 乙醇中约 1 min 2. 剪开头部皮肤,快速取出大脑,尽量保证完整性 3. 将大脑放入预冷的 DMEM/F12 基础培养基中 4. 在超净工作台中,去掉外层血痂,脑膜,外层血管(平皿上操作) 5. 去掉白质(松散状),保留灰质(贝壳状的左右脑)。 6. 4 ℃ 预冷培养基多次清洗 7. 将大脑剪成 1 mm3 的块状,转移至无菌的 50 ml 离心管中,将块状大脑剪碎,移液枪吹打。 8. 900 rpm 室温离心 4 min,弃去上清,然后添加 5 ml DMEM/F12 无血清培养基
如您有原代细胞提取、原代细胞分离、原代细胞购买等需求,欢迎大家联系我,我是丰晖生物细胞技术支持小熊 电话:18975830594 QQ:1761948930 丰晖生物提供细胞系、原代细胞、质粒载体、菌株、cDNA 克隆、ORF 克隆等产品销售及实验服务 |