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细胞转染
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上海沪震生物科技有限公司
转染技术的选择对转染结果影响很大,许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。本公司主要的转染方法:脂质体转染法、电穿孔转染法、病毒感染法。
阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前实验室最方便的转染方法之一,其转染率较高,优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性,所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下,高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。本公司针对细胞死亡研发出了一种电转保护剂, 大大的降低了细胞的死亡率,同时也提高了电穿孔转染效率。
对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染,此法可以快速100%感染,检测成功率高。
细胞
原代神经细胞
原代狗间质干细胞
原代小鼠间质干细胞
A431
THP-1
LA-4
HL-60
HepG-2
脂质体转染效率
3%
0%
4%
2%
5%
10%
30%
Etrans kit转染效率
70%
45%
50%
40%
60%
65%
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