那么,我们用什么病毒?在脑研究中常用的病毒里,由于HSV、RV、PRV等病毒毒性大且NHP的感染效果不好,而慢病毒体内应用的扩散效果差,所以AAV是首选!而AAV有多种亲和力不同的血清型,目前的报道中,使用各种血清型的脑研究均有报道,且说法莫衷一是,具体如何选择需要根据具体需求选择(关于特定脑区使用何种AAV的建议可直接回复本邮件)。接下来,我们将向您介绍两位合作研究者的使用报告:
在这篇文章中,作者在猕猴大脑皮层定位注射和元构建的AAV2/9病毒或AAV2/2病毒(5ul),携带绿色荧光蛋白。表达6周后,可以明显观察到大量的皮层神经元被成功标记(图1)。同时,作者还比较了不同血清型AAV感染猕猴大脑皮层神经元的效果(图2),能够明显看到和元构建的AAV2/9和AAV2/2均能够高效感染猕猴大脑皮层神经元。
该病毒能够高效感染猴皮层神经元,无论是1x放大倍数的视野还是单细胞检测,均能在同一细胞看到红色(tdTomato)和绿色荧光(GCaMP5)。
以上两组实验不约而同地使用了AAV2/9,结果充分说明,和元上海的AAV2/9型病毒能够高效地在NHP动物中使用,特别是对于皮层神经元的侵染具有非常好的测试结果。
其他信息
除皮层外,AAV2/9也能能够很好地侵染皮层下脑区神经元(数据未发表)。此外,根据过去的文献报道,AAV2/5型病毒能够高效地侵染皮层下多个脑区,如纹状体、杏仁核等(更多信息可以联系我们)。
这里有个提示,由于CAV2等大量逆向标记病毒在NHP脑中侵染效率低,前段时间OBIO发布的、拥有逆向标记能力的rAAV2-retro载体也有望在NHP脑研究大放异彩!
有两组测试结果探路,还担心什么呢?研究非人灵长动物的您,快拿起电话或发邮件联系我们吧!
参考文献:
1.Poo MM, Du JL, Ip NY, Xiong ZQ, Xu B, Tan T. China Brain Project: Basic Neuroscience, Brain Diseases, and Brain-Inspired Computing. Neuron. 2016;92(3):591-6.
2.Cyranoski D. Monkey kingdom. Nature. 2016;532(7599):300-2.
3.Li M, Liu F, Jiang H, Lee TS, Tang S. Long-Term Two-Photon Imaging in Awake Macaque Monkey. Neuron. 2017;93(5):1049-57 e3.
4.Wu SH, Liao ZX, J DR, Zheng N, Zhang LH, Tang H, et al. Comparative study of the transfection efficiency of commonly used viral vectors in rhesus monkey (Macaca mulatta) brains. Zoological research. 2017;38(2):88-95.