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pBST-II T vector使用说明书

制品说明                                                                                              

pBST-II T vector是一种高效率克隆PCR产物（TA克隆）的专用载体。本载体又pBluescript II SK(-)改建而成，在pBluescript II SK(-)载体的多克隆位点处的BamHI和EcoRI之间插入一段两端都带XcmI酶切位点的基因，用XcmI进行酶切反应后，在载体两端的5’末端分别产生一个碱基“T”的突出。因大部分耐热DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3’末端添加一个碱基“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。

由于本载体以pBluescript II SK(-)为基础构建而成，所以它具有同pBluescript II SK(-)载体相同的多种功能。例如：含T7/T3启动子，可以通过相应的RNA聚合酶进行cRNA杂交探针的合成；含T7/T3、M13/M13 reverse引物结合位点，可以用相应引物进行测序等。您可以用本产品自带的高效连接液进行连接试验，也可以用普通的T4 DNA Ligase进行连接反应，连接液可以直接用于转化细菌，大大方便了试验操作。

制品内容

保存：-20℃

连接效率

    Control Insert经克隆后，有90%以上含有插入片段。

用途

    进行TA克隆，克隆PCR产物。

    对克隆后的PCR产物进行T7、T3、M13、M13R进行DNA测序。

实验操作

Ø         加入pBST-II T Vector 1ul、2* Ligase Solution 10ul、纯化的PCR产物3~5ul (Control Insert  1ul)，补加ddH2O到20ul；

Ø         置16℃连接4-6h或者16℃过夜连接（也可进行冰箱4℃过夜连接，但是效率可能会降低）；

Ø         取10ul加入到100ul感受态细胞(如DH5a)中，冰中放置30min；

Ø         进行42℃热激90S，再冰中放置2~5min；

Ø         加800ul SOC培养基或者LB培养基进行培养1h；

Ø         之后离心弃800ul，用剩下的溶液重悬细菌，涂布含有amp的平板；

Ø         37℃培养16-20个小时，挑取单菌落进行培养、鉴定。

pBST-II T vector结构