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Safe Harbor基因敲入
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安全位点基因敲入试剂盒及敲入克隆
GeneCopoeia
人类第19号染色体上的 AAVS1(又名为 PPP1R2C 位点)或者小鼠基因组上的 ROSA26是经过验证的“安全港”位点,具有开放的染色质结构,可以保证转入的基因不扰乱内源基因和/或其他调控因子的功能。
特异靶向 safe harbor 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 能在基因组的 safe harbor 位点上生成 DNA 双链断裂(DSB),诱发 DNA 的自然修复机制,促使该位点与对应的 ORF 敲入克隆之间发生同源重组(HR),将 ORF 敲入克隆上的 DNA 片段整合到基因组的 safe harbor 位点。
基因组编辑工具介导的 safe harbor 基因敲入原理图
人类第19号染色体上的 AAVS1(又名为 PPP1R2C 位点)是一个经过验证、能确保转入 DNA 片段预期功能的“安全港”位点。该位点是一个开放的染色体结构,能保证转入基因能被正常转录。另外很重要的一点是在该位点插入外源基因片段对细胞无已知的副作用。靶向 AAVS1 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系能特异剪切人类第19号染色体上的 AAVS1 位点,生成DNA双链断裂(DSB),触发DNA的自然修复机制,诱导位点与 AAVS1 供体 DNA 克隆之间发生同源重组(HR),将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 safe harbor 位点。1)TALEN试剂盒Genome-TALERTM人类AAVS1 safe harbor基因敲入试剂盒专为转基因实验设计,能通过 TALEN 介导的同源重组将您感兴趣的基因、筛选标记或其他遗传因子转入位于人类第19号染色体上的AAVS1 safe harbor位点。 试剂盒包含一对 AAVS1 TALEN 质粒,一个 AAVS1 供体载体或一个供体克隆质粒*,一个阳性对照供体克隆质粒以及两对基因敲入PCR 验证引物组合。2)CRISPR试剂盒Genome-CRISRTM人类AAVS1 safe harbor基因敲入试剂盒专为转基因实验设计,能通过 CRISPR-Cas9 介导的同源重组将您感兴趣的基因、筛选标记或其他遗传因子转入位于人类第19号染色体上的AAVS1 safe harbor位点。 试剂盒包含1个 AAVS1 sgRNA/Cas9 表达克隆,1个 AAVS1 供体克隆载体或供体克隆*,1个阳性对照供体克隆及两对基因敲入PCR 验证引物组合。3)敲入克隆人类AAVS1 safe harbor基因敲入克隆是装载客户感兴趣的基因 ORF 的 AAVS1 供体克隆。该供体克隆可搭配上述试剂盒使 用,将客户感兴趣的 ORF 特异敲入位于人类第19号染色体上的 AAVS1 位点。试剂盒中的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系靶向剪切 AAVS1 位点, 产生 DNA 双链断裂(DSB),使该位点发生同源重组(HR)。目前这一系列敲入克隆有超过20,000条序列确证的人类 OFR 可供选择。4)AAVS1 供体克隆客户定制服务 提供AAVS1供体克隆客户定制服务,为客户构建含有突变基因或其他遗传因子的敲入克隆,用于针对 AAVS1 位点的基因敲入实验。
ROSA26 位点(又称为 ROSAβgeo26 位点)位于小鼠基因组第6号染色体,最早是在一支名为 ROSAβgeo26 的小鼠品系中被发现的。该品系的小鼠因为一个随机插入的基因,在所有组织中都能检测到高水平的β半乳糖苷酶表达。该位点表达一个编码转录本和两个非编码的转录本,只有非编码转录本的序列受到这个外源插入的干扰。虽然两个等位区都带有外源插入片段的纯合子小鼠幼崽出生率略低于杂合子幼崽,但纯合子幼崽也能正常发育并繁殖。自此,“ROSA26”位点就被用于基因转入;这个位点的基因敲入对细胞及小鼠的健康无副作用,并能保证转入基因的正常稳定表达。特异靶向 ROSA26 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系能在小鼠第6号染色体上的 ROSA26 位点上生成 DNA 双链断裂,触发细胞的 DNA 修复机制,诱导基因组与 ROSA26 供体克隆之间发生同源重组(HR),将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 ROSA26 safe harbor 位点。1)TALEN试剂盒Genome-TALERTM小鼠ROSA26 safe harbor基因敲入试剂盒能通过 TALEN 介导的同源重组将您的目的基因、筛选标记及其他遗传因子敲入小鼠基因组上的 ROSA26 位点。试剂盒包含1对 ROSA26 TALEN 质粒,1个 ROSA26 供体克隆载体或供体克隆*,1个阳性对照供体克隆及两对基因敲入PCR 验证引物组合。2)CRISPR试剂盒Genome-CRISPTM小鼠ROSA26 safe harbor基因敲入试剂盒能通过 CRISPR-Cas9 介导的同源重组将您的目的基因、筛选标记及其他遗传因子敲入小鼠基因组上的 ROSA26 位点。试剂盒包含1个 ROSA26 sgRNA/Cas9 表达克隆,1个 ROSA26 供体克隆载体或供体克隆*,1个阳性对照供体克隆及两对基因敲入PCR 验证引物组合。3)敲入克隆
小鼠ROSA26 Safe Harbor ORF敲入克隆是装载客户感兴趣的基因 ORF 的 ROSA26 供体克隆,可搭配小鼠ROSA26 Safe Harbor基因敲入试剂盒使用,将客户感兴趣的 ORF 特异敲入位于小鼠第6号染色体上的 ROSA26 位点。试剂盒中的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系靶向剪切 ROSA26 位点, 产生 DNA 双链断裂(DSB),使该位点发生同源重组(HR)。目前这一系列敲入克隆有超过20,000条序列确证的小鼠 OFR 可供选择。
4)小鼠ROSA26供体克隆客户定制服务GeneCopoeia 也提供小鼠 ROSA26 供体克隆客户定制服务,为客户构建含有小鼠 ORF,突变基因或其他遗传因子的敲入克隆,用于靶向 ROSA26 位点的基因敲入实验。
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