如果你没有做过这方面的实验,那么你可以去网上查一个protocol,按那个上面写的做就可以了,因为这个实验并不难。这要你就可以明白实验的原理。
发表于2008-04-14 14:12
co-ip的注意事项: 1.它只能研究在细胞溶胶中的蛋白质相互作用; 2.必须有proper control; 3.不能检测暂时的相互作用; 4.不能检测不容的生物大分子间的相互作用;
发表于2004-10-20 11:10
一般的裂解液如RIPA,是无法区分细胞核与细胞质的。如果要把胞核蛋白与胞浆蛋白区分开,你需要增加特殊的步骤才可以,如两者的沉淀速度不一样,细胞核部分更容易沉淀等。
发表于2009-12-28 12:33
shylook: gst pull down 和 co-ip区别
Co-IP 一般来说是证明两个蛋白的相互作用,但不排除通过第三个蛋白介导的间接相互作用。 GST pull down 一般可用来证明直接的相互作用。
发表于2012-09-16 13:39
shylook: 加beads后,不震荡的或高速离心,对蛋白提取的结果是否影响
首先co-IP前提取蛋白 不需要震荡 即使震荡 我想 也不会影响相互作用的。 高速离心的话 更不需要考虑了 因为你不高速离心 细胞裂解后的碎片会很大程度得干扰你的IP结果。
发表于2012-05-06 20:32
jacqueslm2001: 实战指南——免疫共沉淀篇(进阶)
想获得切实可靠的相互作用数据,那么裂解液的选取相当讲究:首先盐浓度至少0.15M或以上,通常IP体系中NP40含量0.2-0.5%,可适当添加EDTA,螯合金属离子保护DNA和蛋白。
发表于2010-11-11 12:06
foreverpang: 已经CO-IP发现作用的蛋白应该如何研究
已经CO-IP发现作用的蛋白应该如何研究:首先,确定一下A蛋白与b和c结合的部位确定,然后就看看这几个基因的promoter部分有没有相关性。
发表于2012-12-19 17:07
jacqueslm2001: 免疫共沉淀CO-IP中beads与蛋白结合的问题
免疫共沉淀CO-IP中beads与蛋白结合时,加了抗体的那组,条带很强,不加抗体的那组,条带大小一样,但是不强。
发表于2010-11-11 19:08
jacqueslm2001: 实战指南——免疫共沉淀篇(进阶)
想获得切实可靠的相互作用数据,那么裂解液的选取相当讲究:首先盐浓度至少0.15M或以上,通常IP体系中NP40含量0.2-0.5%,可适当添加EDTA,螯合金属离子保护DNA和蛋白。
发表于2010-11-11 12:06