makeway129: 实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT-PCR
一般的RT-PCR引物是不能用来做是实时荧光定量的的引物的,但是你可以设计出兼顾二者的引物,除了要注意一般引物设计的原则外,愚见认为还要注意下两个问题: 1:设计引物扩增出来的片段一定要小一点不要超过250bp尽量在200bp以内,150bp以上 2:实时荧光定量的引物一定要更加注重它的错误引发效率,越低越好。
发表于2008-08-01 23:05
wqwqwqwqwqwq: real-time Q-PCR技术介绍
多聚集链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术发明至今已近20年了,在这期间技术得到了不断的发展,近年来出现的实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具。
发表于2006-03-14 17:58
CT值越高说明扩增的产物越多,这个方法我试过;还有就是可以在逆转录的时候增加total RNA量,一般是1000ng;镁离子浓度我没有试过,我们用的是东洋纺的SYBR MIX,就按上面的量来加,mg都是混好的。我们用的内参是18s,一般CT正常能在13,14左右。
发表于2012-02-22 12:57