化学法做的感受态细胞,当然效价要高,常规转化.然后做CRACKING检测菌落.连接主要还是确定载体和插入片段的比例问题,通常都是载体比插入片段在1比10这样吧,可测个浓度多试几个比例。
发表于2005-11-08 00:01
一个比较节约时间的办法是,用4管15ml离心管各加3ml左右的液体LB,其中管1加amp和100ul感受态细胞,管2加kan和100ul感受态细胞,管3加100ul感受态细胞,管4做空白对照.放在摇床上37度,150rpm(因为感受态细胞比较脆弱) 3h 左右就可看到结果(也可适当放长点时间,结果更明显)!
发表于2005-06-07 23:51
介绍一下自己的经验,我制备大肠杆菌感受态是完全按照分子克隆上的氯化钙法做的,效果不知道,因为用了一次自己做的以后就用买的了。买的是天根公司的。
发表于2008-05-06 22:06