萧翎
发表于 2004-04-22 20:48
正好最近也在做EMSA,把自己的一些经验和你分享一下把:
1.P32和DIG的我都作过。说实话,做P32的时候还是有些影响的,不知是不是心理作用,反正那段日子一直觉得头晕,所以后来才换到DIG上面来了。
2.如果说没有试剂盒的话,P32相对比较简单一些,不需要太多额外的试剂,因为DIG标记的,你至少要买DIG,末端转移酶,洗膜和显色一大堆东西。如果你作的次数少的话,比如2-3次可以搞定,P32比较省钱,但是如果比较多的话,我觉得DIG的比较好,因为它的储存时间一年以上,不像P32半个月就不能用了。P32要1-2K,一个Roche的DIG试剂盒也就5K,至少能做2-30次。
3.我觉得你的核蛋白量还可以了,最多多加一点好了。我当时0.5-0.6ug/ul也作过,效果也还行。
4.EMSA摸索起来大概一个月把,DIG的要更长时间。先把protocol看透,实验时注意保护好自己。其他的应该还是比较简单的,可以看看这里大家发的一些帖子,找找灵感。DIG的,可以更Western,Nortern的高手请教一些转膜,洗膜和压片的经验。
5.P32,一般都是用promega的东西;DIG的,我现在用的是Roche的,据说Pierce的不错,可惜没用过,好像也是4-5K左右把。
以上一些个人的体会,希望对你有所帮助,也希望高手指教~~