qiaolizhang
发表于 2005-01-04 21:56
DH5a制备化学感受态细胞应该不是太麻烦,一般用CaCl2的方法,就是注意其中几点:
1.所用试剂必须是最高级别的,包括水,最好是Milli-pore级别的。
2.所用器皿,枪头,离心管,还有你的甘油等必须严格灭菌,因为你的培养基是不含Amp的,再说,你的感受态细胞很脆弱。经不起大风大浪。
3.关键一点:步步不离冰。温度波动会影响到你的成功率。
4.离心后回融不要剧烈震荡,始终记住,感受态细胞的脆弱性。经不起折腾。经验人士告诉我可以用枪轻轻吹打。上次我做,好多都没有回融,老板说是细胞死了,让整个都扔掉,我没舍得,后来转进去pUC18,在LB+Amp上还是长出菌来了。
5.保证你培养的大肠杆菌OD值在0.5左右。别让细胞长老了。
6.可以先在超低温冰箱中用离心管盒放一些乙醇(工业酒精即可)预冷,分装后将离心管插入超低温冰箱的乙醇中保存即可。
一家之言,仅供参考。