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各种染色方法大荟萃

关键词: 多种染色方法 总结 2015-07-03 16:53 来源:丁香园论坛 点击次数:7554

A

AgNOR 染色法:

1、试剂配制:

(1)AgNOR 染色液:

甲液:明胶 2 g 溶于双蒸水至 99 ml,在 60℃ 使之完全溶解,再加入纯甲酸 1 ml 摇匀待用。

乙液:硝酸银 50 g 溶解于双蒸水中至 100 ml,4℃ 冰箱保存。

(2)AgNOR 工作液

取甲液 10 ml,乙液 20 ml 临用前混合。

2、步骤:

(1)切片脱蜡至水

(2)双蒸水洗 2 次

(3)AgNOR 工作液中(25℃)浸染 30 分钟(暗处进行)(镜下观察)

(4)双蒸水洗 3 次

(5)脱水, 透明, 封固

3、结果:油镜观察,细胞核及胞质背景为淡黄色, AgNOR 呈棕黑色颗粒状。

B

鞭毛染色法:

1.试剂配制:

甲液:丹宁酸 5克,氯化铁(FeCl3)1.5克,福尔马林(15%)2.0毫升,氢氧化钠(NaOH)1% 1.0毫升

乙液:硝酸银(AgNO3)2克

蒸馏水 100 毫升

制备乙液时,待硝酸银2)A1乙t及胞质背景为q2)A1乙t 马l/1 ,氢氧化钠}q1 为q2)进滴>B<很浓厚沉淀。 ,潝为q2)A1胞腢腢逐滴>

B<现薄雾p> 2轻 5胈失, A绛边滴>B<现略有轻微不胈散薄雾

(2)叜/1> 菌接f="新t肉汤琼脂斜面上, 水7°培养/1—O0小质背 ,> 取甲液 10O)载玻洗迭 隔一厘米4, 接f=" 沾一滴时,, 接f=" 挑 湿润处 臏夔少许保一端, 迭氀斜玻洗 1 培养 取甲液 103)干燥涂洗 >< 时,冲 tro<残, 干户及胞冲去残,t 适量及胞< 时,冲 tro甲液 104)淡 > 取甲液 1Hh意事项>

(2)叜/1htt胞最好随 克t 放

取甲液 10O)一定要 净FeCl<

氧戙颗较脏> 取甲液 103)防止及培养 有克 tro甲液 104)水忌 接f=" 涂抹培养 tro甲液 105果玻洗一定要 净tro< 洗衣粉煮沸。 取甲液 106) 取甲液βt半乳糖苷酶可以催二糖乳糖解为单糖> 取甲液βt半乳糖苷酶 以 X-gal-溾-4--3t吲哚βtDt半乳糖苷)等显p:/底 > 取甲液X-gal 可以b>3组织http:/5背以在所有表达βt半乳糖苷酶 织上产生颜p:/> 取甲液应该是 以pan 感 织水洗http:/> 取甲液Cg>

1.CAEg 溶于

(1)AgNOR 染色液:

甲液:明 ub>)萘酚-AS—D 醋硝使之 N,N-二甲 :胺酸 > 取甲液 10 ml4酸副 ub>)混 副 (EM 级)1 g之宲时,待骤:内。

䡝m明L HCl 5m明p> 保1 > 背等 ub>与新鲜 4酸争2克<1)p> 2 淀粉碘 色纸

    瞬间色纸应变为蓝p://合格背概背不变p>

    取甲液 10 30 B ub>)oH1mol/L Michaelis Ve al-醋缓冲 步(PH 7.6)3/p>

    固>< 1moIL HCl 1 PH 值调> 6H3切片脱蜡至溶于

    (2)双蒸氆 A.至B二胞1)p> 过 p>

    <), 1 ml 最 度为 0.04mol/L.> (3)AgNOR 尴洗 保上述A1胞"> 1 h(3)甲液 10 30 冲 tro甲液 10水苏木素"htttro甲液 10穕干燥,细tro甲液Gg>

    1.Gblanlius 为q2反应w.b><嗜2反应

    甲液: 染色液:

    甲液为q2): 1% 为q28, A1胞固 时,待87酸银2)A10.2M 醋缓冲 步(PH5.6)银2)A1还原: 对苯二酚 1 制争K克< 5 制时,待硝酸银2)A1乡至溶于 (2)双蒸水洗 2 次 (3)AgNOR 甲酸为q2)"> 小质甲液 10 30 纸吸去周围2),时,速 > (5)脱水, 45酸䝼还原处 .. 1 弉

    3、结果时, > (5)6)5% 丫代K克<处 .. 1 弉

    >B

    >在保 AgNOR朕此w.b主要忝 䝼诊断trong>鞭毛染色H:

    1.HID配制:/p>

    甲液: 染溶于 (2)双蒸水洗 2 次 (3)AgNOR 1 当 弉

    3、3果时, > (5)脱水Schiff 进染弉

    3、结果pan , 封15弉

    概 2~5 不做背在染好 <蓝htt 呈 2)

    <> (5)6)时, > (5)730 二 。<8~24 小质> (5)830 <蓝 步(pH2.5) 染~2弉

    3、9)时, > (5)脝果:油镜观察,细胞核2胞质背: K克毫耧>B<, 羧 毫耧p>放粘p> 质蓝p:/troK克毫耧>见保大肠膜p> 而小肠膜仅出现放粘p>此w.bhref忝 定肠 型trong>鞭毛染色HPp>为q2).b><>

    (1)AgNOR 染色液:

    甲液:明醋缓冲 备p>PH3.62)A10.2N 醋缓冲 p>PH3.6

    <备乙液时,待24/p><备乙以下 椄>,此w:

    (3)AgNOR 1 %为q2)> 甲液为q2 1 g> 甲液醋缓冲 备p>PH3.62)Ap>

    3、32 %为q2)> 甲液为q2 0.2 g> 甲液醋缓冲 备p>PH3.62Ap>

    3、水5 % 60≤> 甲液 605 g> 甲液醋缓冲 备p>PH3.62)Ap>

    3<把醋缓冲 备> 4酸左右, 60p> 2 37酸温箱 腢腢待用。搅拌tro甲液 103 %对苯二酚ml 临用前苯二酚 0.3 g> 甲液醋缓冲 备p>PH3.62Ap>

    3、6) 60对苯二酚ml 临用3 %对苯二酚ml 酸临用5 % 60≤15Ap>

    3、730 影> 甲液 60对苯二酚ml 6Ap>

    32 %为q2)囉Ap>

    3<操作到第 4 完成> 5弉

    保 56酸 液<

    (2)明 织 2 次 (3)AgNOR 醋缓冲 备中(25℃)浸染 30 > 䡝 %为q2)迭56酰1 小质> (5)4蒸水洗不, 。直接 影 56酰肉眼>B<黄/stp:/迺止tro甲液 10 影p> 2 56酸,进浸中(弉

    3、630 p>

    3、730 : 观背漌细tro甲液胞质背景幽门弯曲菌>B鞭毛染色Highman &刚 u制:<>

    (1)AgNOR 染色液:

    甲液 &刚 u: 刚 0.5 g & 8:甘油骤> 甲液 耧

    3至溶于 (2)双蒸水洗 2 次

    (3)AgNOR &刚 u染~2弉

    3、 30 耧 (5)4蒸 p>

    3、5水苏木素"htt(弉

    3、630 p>

    3、730 :油镜观察,细胞核及胞质背景䷀粉u B鞭4胞豻淀粉u制 氢p> 甲液丮定䷀粉u变 玻撃u变 䝼0原 织氧者刚 uhttp:/B

    常f忝诊断 状腺 胰岛 AgNOR 䭉trong>鞭毛染色L:

    1.六 2)制:/p>

    甲液: 染色液:

    甲液六 2):

    甲液3%六25甲 四 , A1胞5Ap>

    32.5% 为q28, A1胞0.5 Ap>

    3摇晃背清。

    30~4)Ap>

    3至水

    (2)双蒸水洗 2 次

    (5)NOR 0.5% 碘赸15弉 (5) 30 > 2)甲酰1-2 小质背>

    > 2)80-9酰半小质左右)时, 水洗 3 底膜>B<黑制><><(5)4蒸0.2% 克,调>秒> (5)5)丽春 u/p>

    3、630 速 > (5)730 烘干t 观背漌洗tro甲液胞质背景肾小球 底膜>B<黑制><霉菌背漹力纤绾及一些网状纤绾也>B<黑制trong>鞭毛染色M:

    1.Mallory 三制: /p>

    甲液: 染水

    <(2)双蒸水洗 2 次

    (3)AgNOR 0.5% 耧" u, A1胞inp>

    3、3果时, > (5)脱水 3 胞-2 inp>

    3苯 蓝 0.5 g。桔黄 G 。磷目 舖磷钨硝g时,徼2)Atro甲液 10果时, > (5)6)95%

    3、730 : 观背漌洗tro甲液2胞质背景0原 绾蓝p:/p> < AgNOR 黄p:/p> p>鞭毛染色Mallory 磷钨~苏木素u制:<>

    (1)AgNOR 染色液:

    甲液苏木素 0.1 g 钨2.℃ 时,徼2)Ap>

    3<将苏木素 钨之 8酸银时,troﭴ苏木素冷,t > 乣钨义p>1)p> 星期t/可 1 解概耥氢氏>

    0.2 g 克<, p其成熟切片脱蜡至溶于 (2)双蒸水洗 2 次 取甲液 10 ml 0.25% 克< , A1胞5弉

    取甲液 10 30 时, tro甲液 10水2.5% 草輂白5弉

    取甲液 10果时, 多25> 取甲液 106) 保钨苏木素uA1胞2~24 小质> 取甲液 107)95%酒精快p分化t/ 纸吸去剩余酒精p> 甲酸温箱进烘干> 取甲液 10830 二甲苯 观背漌细tro甲液胞质背景 绾胶质肌胶质 胶 绾 绾素t/纹肌ﭴ均htt舐蓝p:/tro0原p> 状纤绾 骨 质着黄p:/舖砖 p>鞭毛染色Masson 三制制:/p>

    甲液: 染色液:

    甲液丽春 耧 ub>) 丽春 0.7 g 耧 0.3 g> 甲液时,徼再劥作醋硝p><备乙液 蓝: 苯 蓝 2 时,徼98劥醋2p><备乙亮绿ub>) 亮绿0.2 g 时,徼2)A作醋0.2 ><备乙液味克<精: 苦味克纯95%酒精进的饱 步骤, 95%酒精2Ap>

    3至溶于

    (2)双蒸水洗 2 次 (3)AgNOR 苏木素u 5~弉

    3、3枷 酒精分化> (5)4蒸 蓝挖t时, (苏木素可不u)甲液 10丽春 耧 ub>进染5~8弉

    3、630 时, > (5)730 1% 䣷钼 染~3弉

    3、830 不 直接 蓝舖亮绿ub>5弉

    甲酸温箱进烘干p> 2甲苯 观察,细胞核及胞质背: 0原 绾蓝p:/p> 蓝"htt30 绿p:/p>亮绿"htt30 , 肌ﺤ绾胞躤绾素 p>鞭4胞h意>

    (2)双蒸此w.bh泛f忝0原 绾 滑傌鉴别p> 2为肾组织h ><軄色肾小球 重要 制: 取甲液 10 ml AgNOR http:/分化很重要><軄色控

    3、5水:油镜观察,细> 取甲液唾1弱K克毽>一般>B<蓝p:/tro f忝 定OR ...泡性质 别 当 AgNOR>B<现印戒u 征质> 取甲液染色J:

    1.甲 u洛宁:<>

    (1)AgNOR 染色液:

    甲液:明2% 甲 u, A1胞>

    甲液 :methyl greenOR 1 g> 甲液时,> 甲液 帉 烷抽提 1www.b详> 取甲液 10 ml5%u洛宁, A1胞>

    甲液u洛宁 G 10py ine G 1 1 g> 甲液时,>

    3、30.2M 醋盐缓冲 p>pH 4.8><><(50.2M 醋ub>4p><备乙0.2M 醋59Ap>

    3、水甲 u洛宁>

    甲液2% 甲 u, A1胞>< 抽提 5 Ap>

    35%u洛宁, A1胞p><备乙液时,徼2p><备乙0.2M 醋盐缓冲 p>pH 4.8><18m> 甲液 u, A1胞抽提 >3绿p:/粉up> 属三勅 烷慍p> 这f="htt 甼代烷暗f忝 背晶紫而形成睼迀f="合 tro甼忝 化暗f>< 就比 t/引进䔲 连接 并不细p> 容易仝 >3失tro 一方面入 化过 迭还有一部弉 虶紫并没有 ,因此p> 2有人认>3甄迭永有少 䔲 紫 绨虶紫 份> 但是p> 2有人认>3甄 紫乃 䝼衰败产物>< 在䂨存过 迭ub>3断产生甄 紫tro 此p> 酚 帉 烷骤: 荡1)p> 2 ...䔲 紫 之帉 烷>3而>B<紫 p><迺止p可 到 涝䔲 绿uA1胞于双蒸至操作/

    (2)双蒸新鲜织曺定 Carnoy 氏 p>4(3~6 小质背 95%酒精 w酒精: 二甲苯 观背石次包埋> 取甲液 10 ml尴洗 二甲苯 2 次 取甲液 103) > 乔 u洛宁保室温观~60弉

    取甲液 10水, l尴洗。不 , 。 纸吸干多余tro甲液 10帙酮迅p分化> 取甲液 106)转 帙酮二甲苯双:明 tro甲液 10730 二甲苯 观 2~固 取甲液 10830 性 0弌细> 质背景存在保黑 仁 ... 呼>B<红紫:/p> NOR http:/ ...: 呼绿p:/ 绿pp:/tro胞核及胞对照/www.b>

    (2)明, 一连续尴洗 呼p> 乔 u洛宁 ttp:/> 取甲液 10 ml尴洗纯10% qprechloric acid30 于 R 工䤄 .. 12~18小质t 1% 碳 2)

    < 冲 5弉 乔 u洛宁 ttp:/> 上述www.b之一处 .. 水洗就迺阴性trong>鞭4胞h意事项>

    (2)明 织不宜 醛曺定p> 应逞 Garnoy 氏曺定ub>氛迺酒精 醋能较好地

    取甲液 10 mlGarnoy 氏 曺定u本. 间不宜太长,超过一天5溶于背不 > 取甲液 10 30 h意色液.质 别 u洛宁永不/号. p> u制 背不同tro 洛宁二 .. 例h当> 取甲液 10水 溶于叽 pH 应为 4.8左右,概 pH 过低>< 溶于背差;pH 偏 戙u洛宁于背不良tro甲液 10帙酮 化间要很好掌握p> u间不宜太长> 取甲液 106)酚<䔲 绿u洛宁> 液

    取甲液 10a离暗f><: 呼 呼都有 p> 又有 p> 故为两 䔵 质tro一定. 件下背以离而>䔵 ,因此都有一定.筞点tro 洛宁<,进离t都产生>阳䔵 .离子tro 离t在俔价氮处产生二个正䔵 , 耧较弆> 側洛宁离仅产生一个正䔵 , 耧较 弱t在http://二 .)双竞争, 耧较弆䔲 绿就迎NOR >< 点 pH3.8~4.NOR 載双极耧吸倌 )p> 耧较弱 洛宁丝黑>< 点 pH4.6~5.NOR 吸附 )> 取甲液 10bOR 聚)暗f><䔲 绿对聚) 睼 DNA 有亲 p> 派洛宁<聚)低睼 RNA 有亲 tro 此p> 思虑 逞观DNAp> 而派洛宁逞观RNAtro 氢pPNA 主要存在保黑 仁 ..p> 它主导 AgNOR 蛋白 舐tro AgNOR>生p> NOR质蛋白 舐亢p质t匠仁 NOR质睼 PNA 增> 1耧 AgNOR 仁 大p> NOR质嗜 > 偵 AgNOR> 法寍 AgNORNOR质合舐 法球蛋白p> NO腺皮合舐NO蛋白ptro 此p> 这些AgNORNOR质有很弆嗜 性troNOR质嗜 p> 是蛋白 舐增>u忰tro甲液> 1.S:

    1.脂肪p>账Ⅲ水 /p>

    甲液: 染色液:

    甲液账Ⅲ 0.1~0.2 70%酒精2)Ap>

    3<苏洦Ⅲ 保 70%酒精进, 热饱 , h冷前过 , 静 一夜切片脱蜡至溶于

    (2)双蒸憰冻尴洗〈8~微米)> 取甲液 10 ml70%酒精曺定 1 弉

    取甲液 10 30 苏洦Ⅲ<精迭~30弉

    取甲液 10水70%酒精 掻多余. tro甲液 10枌 tro甲液 106水苏木素"htt~5 弉

    取甲液 10730 1% 酒精分化> 取甲液 10830 , 。蓝挖,甘油漌细tro甲液胞质背景脂肪 黄 红p> 变 还是脂滴tro甲液> 1.P:

    1. 碘-> 2-马休黄 制: (PASM-M)/p>

    甲液: 染色液:

    甲液六 2原) 3 %六甲 四 , A1胞(乌洛托品) 2酸银5 % 为q28, A1胞银> 取甲液六 2弈暗处景六 2原察银, 透明, 2酸银5 % 丼砂 (四硼克<)2银> 取甲液 呈 景呈 0.1 升5 % 丫克< 硝酸银

    (2)明襸规 2 次

    (3)AgNOR 0.5% 0 2弉

    3、 30 时, 封固

    3、4蒸 六 2弈暗处迭 小质左右 (恒温 58)甲液 10果时, 封固

    3、6蒸0.2% 克,-2 弉

    3、7果时, 封25℃)浸染8水呈 制 -15弉

    3、睪 温箱烤干p> 2甲苯 观背 性 0弌细甲液胞质背景肾小球剂AgN管 膜>B<黑制><颗 AgNOR>B<黄制>鞭4胞h意>

    (2)双蒸六 2弈暗处现鼚现氢氏能帀 取甲液 10 ml 固b摇后可 5 % 弐毫 () , A1胞0 40弉<颗 能背更佳> 取甲液 10 30 马休黄主要 u AgNORtro w酒精>3: 制䝼0 :背直接 温箱户吹风吹干t 洗tro甲液> 1.R:

    1.瑞氏t姬姆萨http://www.bio>

    甲液: 染色液:

    甲液原:> (2A: 瑞氏u 0.8--1 升吉姆萨htt 0.5 > (2B:甘油3囉Ap>

    3C><䔲醇52)Ap>

    3:w.b> 少 B 研磨

    少 B 磨

    少 B 磨……倒l<未 A1部弉, A绛>

    B 磨…… < 匀待氊> C5迭 > C亦可切片脱蜡至溶于

    (2滴滴 玻洗满u本察秒

    透明, PBS2-3 "htt1-3弉迭氀 >< ……弌洗tro甲液> 1.T:

    1.Trycripbluep>揰盘兰 斥 href=

    (1)AgNORAgNOR 胞0.1:加 0.4% Trycripblue 生理盐, A1胞0.1, 1 N球记板上tro 活率 = 不 制 AgNOR / AgNOR X硝%g>

    1.TTC /www.b>

    p> (1)AgNORTTC AgNOR 粒体...䐥珀:酶反应 红p><䔲月赞。 表示 AgNOR tro: 1.V:

    1.VripGieson : /p>

    甲液: 染色液:

    甲液:明饱 苦味克u, A1胞>< 1.22%30 15)Ap>

    3、230 1% 耧 2Ap>

    3、3帊述两f="hA1胞

    (1)一起切片脱蜡至溶于

    (2)双蒸水洗 2 次 取甲液 10 ml苏木素uhtttro睪~5)

    <> (5)3VripGieson 染半弉

    取甲液 10水时, tro甲液 105) 甲酸温箱进烘干> 取甲液 10630 二甲苯 观背漌细tro甲液胞质背景0原 绾 p>

    肌ﺤ绾胞OR 胞躢 AgNOR 制trong>鞭4胞建议><䔨稀释睼 VripGieson ﶲ載双慍制><不95%酒精分化, A背制]鲌刳p> 而且 制 50 > 取甲img alt="" src="http://img.dxycdn想了乙 hre有 > 有思 沿资讯以及酷炫 href="www.b的你t都以舐为师兄 好伙伴/p>

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    乙液:硝酸银 50 g 溶解水中至 100 ml,4℃ 冰箱保存。

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