关键词: 肿瘤细胞 原代细胞
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概述
肿瘤细胞的原代培养与正常细胞的原代培养的条件基本相似。一般常用原代细胞的基础培养基,10%血清浓度即可,在原代培养时需加入原代细胞培养的特制添加物,或原患者血清(1%-2%)以利细胞生长。用细胞生长因子如胰岛素、氢化可的松、雌激素等等。
也可以考虑动物媒介培养。根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子。肿瘤组织分离为肿瘤细胞原代培养的方法主要有组织块法、酶消化法、钽网法、脱落细胞法等。
1.组织块法
将取得的瘤组织去除脂肪、结缔组织及坏死部分,在平皿中用Hanks液洗3次,剪碎组织,切成1-2mm3 小块,接种于培养瓶(或皿)中,37℃、5%CO2 或加盖并塞在普通恒温箱中培养。
2.酶消化法
在剪碎组织,切成1-2mm3 小块中,加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml胶原酶,在37℃水浴中消化30min或更长一些,去除消化液,用洗液洗3次,培养基洗1次后,用完全培养基悬浮,并用吸管吹打分散制成细胞悬液,计数。以(5-10)x108 个/L细胞浓度,在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中,在37℃、5%CO2 下分瓶(或皿)中培养。
3.钽网法
在一张面积约为1cm2 的钽网上放入上述剪碎的一块或几块肿瘤组织块(1-2mm3 大小),用镊子轻压,使其粘于网上,再把钽网放入培养皿中,使网下的组织块与皿壁紧紧接触,于37℃、5%CO2 下培养,每隔2-3天换液一次,5天后可见有上皮细胞从网上移出,并能在相当于肿瘤组织部位形成纯净的单层上皮细胞。
4.脱落细胞法
将新鲜的肿瘤组织去除脂肪和结缔组织,洗液洗2次后,用刀片将肿瘤组织切成细薄片,在切割的同时有许多上皮细胞脱落下来,脱落细胞经洗涤后,加入完全培养基,便可获得较纯的上层细胞,于培养瓶(或皿)中,37℃、5%CO2 下培养,每隔2-3天换液一次,7-10天上皮细胞逐渐长成单层。
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还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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