硝酸银染色
银染的方法种类很多,目前有文献报道的就有 100 多种。但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。大致的原理是银离子在碱性 pH 环境下被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上而显色。由于银染的灵敏度很高,可染出胶上低于 1 ng/蛋白质点,故广泛的用在 2D 凝胶分析上。待找到自己感兴趣的蛋白质点后,再通过考染富集该目的点,然后做进一步的肽段指纹图谱分析(PMF)或序列测定。随着质谱技术的不断完善和 ...
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DIGE荧光差异凝胶电泳技术特点及应用
DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上,结合了多重荧光分析的方法,在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品,并第一次引入了内标的概念,极大地提高了结果的准确性,可靠性和重复性。在DIGE技术中,每个蛋白点都有它自己的内标,并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准,保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异,统计学 ...
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双向电泳操作步骤
水化上样( 被动上样)1. 从冰箱中取出 IPG 胶条,室温放置 10min。2. 沿水化盘槽的边缘从左向右线性加入样品,槽两端各 1cm 左右不加样,中间的样品液一定要连贯。注意:不要产生气泡,否则会影响胶条中蛋白质的分布。3. 用镊子轻轻撕去 IPG 胶条上的保护层。注意:碱性端较脆弱,应小心操作。4. 将IPG胶条胶面朝下轻轻置于水化盘中样品溶液上.注意:不要将样品溶液弄到胶条背面 ...
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琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定
一、目的: 1.学习琼脂糖聚胶电泳的原理和方法; 2.学习酶专一性染色原理及其应用; 3.掌握分离LDH同工酶的方法; 4.学习测定血清LDH总活力的原理与方法。二、原理: 能催化同一反应而蛋白质结构不同的酶,称为同工酶。同工酶的蛋白结构既然有差别,它们的理化性质也就有所差异。因此可用电泳或其他方法将它们分离开来。例如乳酸脱氢酶(LDH)同工酶,它们都能催化乳酸脱氢产生丙酮酸,但经电泳 ...
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