关键词: 硝酸银 银染 注意事项
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银染的方法种类很多,目前有文献报道的就有 100 多种。但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。大致的原理是银离子在碱性 pH 环境下被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上而显色。
由于银染的灵敏度很高,可染出胶上低于 1 ng/蛋白质点,故广泛的用在 2D 凝胶分析上。待找到自己感兴趣的蛋白质点后,再通过考染富集该目的点,然后做进一步的肽段指纹图谱分析(PMF)或序列测定。随着质谱技术的不断完善和发展,对银染后的 f mol 级的蛋白质点直接测定已非难事。这里介绍一种可兼容质谱分析的银染方法,实验程序如下:
银染注意事项:
1. 很多银染程序都使用了戊二醛(glutardialdehyde),它能提高银染的灵敏度和染色结果的重复性,但是因为戊二醛会修饰蛋白质,从而会影响对蛋白质点的质谱鉴定和分析;
2. 保证所有的染色器皿绝对的干净,可使用玻璃或塑料做染色器皿;
3. 水的纯度对染色结果好坏影响是很大的,至少要用双蒸水(导电率<2μS),有条件的可使用 Millipore water;
4. 染色过程中避免手去接触凝胶,必须戴上一次性手套或无粉乳胶手套;
5. 所用的化学试剂一定是要分析纯 ( AR )。
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为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致
做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?
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WB 敷牛奶需要的时间
Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
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WB发光结果异常
我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!
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