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丽春红(Ponceau S)染色是 WB 实验中的一个重要环节,今天就来给大家详解丽春红染色的作用和操作方法。
丽春红染色作用
可用于 PVDF 膜,硝酸纤维素膜和和醋酸纤维素膜上的蛋白的检测。
丽春红染色原理
丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。
丽春红特性
丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS 或其它适当溶液洗去。
为什么要用丽春红染色?
通过丽春红染色可验证转膜效率,及每孔上样蛋白总量是否均等,可以帮助后续实验进行内参调整或问题分析。
特别说明:丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白检测。
操作方法
1. 将转印膜浸没在丽春红染色液中,用摇床孵育转印膜 1-30 分钟。
2. 取出转印膜,用去离子水冲洗膜直到背景干净(通常不超过 5 分钟),条带清晰,记录结果。染液可以继续用去离子水洗涤完全去除丽春红,进行后续的 WB 检测。
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为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致
做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?
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WB 敷牛奶需要的时间
Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
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WB发光结果异常
我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!
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