质粒转化
将质粒DNA导入细菌的过程称为转化(Transformation)。此感受态细菌细胞在CaCl2低渗溶液中膨胀为球状(感受态细菌的制备,见前)。质粒DNA与CaCl2形成抗DNase羟基-磷酸钙复合物黏附于细菌表面,经42℃短时间热冲击处理,促进细胞吸收DNA复合物。在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖。被转化的细菌中,外源基因得到表达。在选择性培养平板上,可选出所需的转化子(即含有质粒DNA的细菌)。 ...
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如何查找质粒图谱
方法一:使用Vector NT 软件做分子实验,经常和不同的质粒打交道,了解各种质粒的图谱信息是必需的,invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音,要想对质粒图谱了解更直观,安装这款软件是非常必要的。这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱。方法二:查找质粒图谱的网站1. Vector Database(addgene)地址:http://www.ad ...
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细菌转化
质粒DNA粘附在细菌细胞表面,经过42°C短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。
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计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率,公式如下:转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积转化频率(转化子数/每ug质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA加入量(ug)下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下:第一天,上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板(一般要48小时以上才能长出单 ...
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