点击看视频 交联是防止 DNA在 3 天的 ChIP 实验中从蛋白上脱落。否则,抗体只能让靶蛋白沉淀,而不能让 DNA 沉淀。交联对转录因子和辅因子尤为重要,因为与组蛋白相比,它们的丰度更低,与 DNA 的结合更弱。
此外,与培养的细胞相比,组织是一种难度更高的样本类型,因为在组织样本中,交联剂更难以进入每个单细胞。因此,延长交联时间对转录因子和辅因子和/或组织材料有利。
但过度交联会导致染色质剪切困难,尤其是使用超声处理法片段化染色质 DNA 的情况下。因此,我们需要找到平衡,同时确保目的蛋白与 DNA 的稳固固定以及染色质的可剪切性。